미생물보존법

소개글

미생물보존법에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Introduction
▶ 배양
▶ 보존
▶ 단기보존법
(1) 계대배양(subculturing)
(2)광유(mineral oil) 침지보존법
(3)동결보존법(freezing)
(4)건조 보존법(drying)
토양보존법
Silica gel 보존법;
자기(porcelain) bead 보존법
▶ 장기보존법
(1)동결건조법(lyophilization)
(2)초저온 냉동보존법(ultra-freezing)
<References>

2 . Materials & Methods
1) 물보존법
2) 냉동실 보존법(동결)
3) 액체 질소 보존법

본문내용

의 20% glycerol 또는 10% DMSO를 동량 첨가한 잘 혼합한다. 세포현탁액을 2㎖씩 동결용 vial에 분주하고 냉장고에서 30분간 방치하여 균사체와 현탁액간의 평형이 이루어지도록 한다.
동결시 냉각 원칙; 동결시 냉각속도(cooling rate)는 미생물의 생존에 중요한 요소로 작용하는데 일반적으로 느린 냉각속도(1～2℃/min)가 냉동보존법에 적당하다.
해동 원칙; 동결된 균주를 녹이기 위해서는 ampoule을 37～40℃의 water bath에 넣고 가볍게 흔들어 녹인다. 유리 앰플의 경우 약 40～60초가 소요된다. 다녹으면 꺼내어 표면을 70% 에탄올로 소독한 후 개봉하여 사용한다.

- 권기석외, 미생물학입문, 월드사이언스, 2004, pp.230~240
- 미생물학 실험교재 편찬위원회, 미생물학 실험, 월드사이언스, 2000, pp.38~41
2 . Materials & Methods
1) 물보존법
세균의 사면배지에 6~7ml의 살균 증류수를 넣고, 잘 분산시켜 현탁액을 만든 후, 이것을 살균 시험관 (예컨대, 1ml의 마개가 있는 작은 시험관)에 옮겨 밀봉하고 실온에서 보존한다.
2) 냉동실 보존법(동결)
건열 살균한 소시험관에 분산매(스킴밀크 10g, 글루타민산 나트륨 1.5g, 증류수 100ml) 2ml을 분주하고 121℃에서 15분간 고압살균한다. 공시세균을 사면배지 위에 1~2일간 저온에서 배양하고 1사면분의 균체를 백금이로 긁어내서 분산매 속으로 옮기고 보텍스 믹서로 가볍게 흔든 후 솜마개를 한다. 솜마개를 파라필름으로 싸서 냉동실 안에 보존한다.
파라필름은 보존 중에 수분이 증발하는 것을 막기 위해서 사용한다. 사용할 때에는 23~25℃의 물에 담가서 녹이며 실온이 높을 때에는 그대로 두어도 된다. 녹인 세균 현탁액을 1~2 백금이 취하여 배지에 옮겨 배양한다. 사용 후에는 시험관을 냉동실에 넣어 다시 동결시켜 보존한다. 세균의 종류에 따라서는 생존율이 다르나 세균에 따라서는 20여 회 반복해서 사용할 수 있다는 보고도 있다.
3) 액체 질소 보존법
채집한 포자를 플라스틱제 소관에 넣고 소관에 붙어 있는 봉합제로 소관의 아래위를 막은 다음 봉합기로 밀폐시켜 액체 질소 용기의 작은 통에 넣어 보존한다.
접종을 위해서 액체 질소 용기에서 꺼낸 플라스틱 소관은 40~50℃의 온탕에 2~5분간 담갔다가 광유로 포자 현탁액을 만들어, 기주에 분무 접종한다.

키워드

미생물,   미생물학,   미생물보존,   미생물보존법