단백질 정량

목차

1. 주 제(Theme) ： Protein 정량

2. 목 적(Abstract)

3. 원 리(Principle)
1) 구조
2) 기능
3) 합성
4) 정색 반응
(1) Biuret 반응
(2) Ninhydrin 반응
(3) Xanthoprotein 반응
(4) Millon 반응
(5) Hopkins-Cole 반응
(6) Sakaguchi 반응
(7) Nitroprusside 반응

4. 기구 및 시약(Reagent & Equipment)

5. 방 법(Method)

본문내용

amkievitz 반응이라 하며, 단백질중에 indole 기를 가진 tryptophan 과 -CHO기를 가진 glyoxalic acid, formaldehyde 등이 존재할 때 일어난다.
따라서 tryptophan을 함유한 casein에서 반응은 양성이기 때문에 이 반응을 우유의 방부제 formaldehyde 검출에 응용할 수가 있다. 그러나 tryptophan을 함유하고 있지 않는 옥수수 단백질인 zein은 이 반응에 음성이다.
조작
단백질용액 2ml를 시험관에 취하고 빙초산2ml를 가하여 녹인 다음, 여기에 진한 황산 1ml를 서서히 시험관 벽을 따라 가하면 초산과 황산의 경계면에 적자색의 환이 생성되며, 이 액을 진탕하여 혼합하면 전체가 적자색이 된다.
이반응은 초산에 소량 함유되어 있는 glyoxalic acid와 단백질 중의 tryptophan 과의 반응에 의하여 생성되는 색깔이다.
(6) Sakaguchi 반응
원리
이 반응을 guanidyl 기를 가진 아미노산인 arginine에서 일어나는 반응으로, guanidyl 기는 -naphthol과 반응하며 그 생성물은 브롬(Br2)과 같은 산화제에 의하여 적색을 나타낸다. 이 반응은 유리 arginine의 비색정량에도 응용된다.
조작
단백질용액 1ml 에 10% NaOH 용액 1ml를 가하여 알칼리성으로 하고, -naphthol 용액 2-3방울을 가해 3분간 방냉한다. 여기에 차아염소산나트륨(NaOCl)용액을 몇 방울을 가하고 잘 흔들면 적색으로 된다.
(7) Nitroprusside 반응
원리
Cysteine 과 같은 thiol 기를 가진 화합물은 파랑의 암모니아 존재 하에서 sodium Nitroprusside 와 반응하여 적색을 나타낸다. Cysteine은 -S-S 결합이 환원되어 Cysteinede으로 되었을 때 비로소 양성반응을 나타낸다.
조작
단백질용액 1ml에 암모니아수 0.5ml를 가하고 sodium nitroprusside 용액 1방울을 가하면 적자색으로 되고, 시간이 경과하면 황색으로 퇴색된다.
4. Reagent & Equipment
ㆍ단백질 표준용액 - 알부민 3.0㎎/㎖
ㆍ뷰렛시약 -CuSO₄ㆍ5H₂O 3g 과 (NaKC4O6 ㆍ4H2o)4 9g을 500㎖의 0.2N NaOH 용액에 용해시키고 이에 KI 5g을 추가한 후 0.2N NaOH 용액을 가하여 1L를 만든다.
ㆍ미지시료 용액
ㆍ분광광도계
5. Method
시험관 번호
1
2
3
4
5
6
7
8
단백질 표준용액(3.0mg/ml)
0.2
0.4
0.6
1.0
2.0
3.0
미지시료용액(ml)
1.0
중류수 (㎖)
3.0
2.8
2.6
2.4
2.0
1.0
2.0
① 시험관 8개에 각각의 단백질 표준용액, 미지의 시료 용액 및 물을 다음과 같이 취한다.
②각 시험관에 뷰렛시약 약 3.0ml가하여 총부피를 6.0 ml로 만들어 잘 섞고 상온에서 30분간 두었다가 540nm에서 흡광도를 측정한다.
③2-7번 시험관에서 바탕시험의 흡광도를 빼어 검정선을 작성하고 미지시료(시험관8번)의 농도를 측정한다.

키워드

단백질,   정량,   protein,   정색반응,   반응