전기영동

목차

1. Theme

2. Purpose

3. Principle

4. Reagent

5. Method

6. Result

7. Disccusion

8. Reference

본문내용

도 채워준다.
- marker를 11㎕ 가량 loading 한다.
- sample을 11㎕ 가량 씩 loading 한다.
④
전압 걸어주기
* 조건은 sample의 특성에 따라 변경될 수 있다.
- Tank와 Lid를 같은 색 끼리 맞춰서 닫아준다.
- Lid에 연결되어 있는 선을 power supply의 구멍에 역시 같은 색끼리 꽂아준다.
(supply에 꽂는 구멍이 4set가 있는데 동시에 사용이 가능 하다.)
- supply를 켜고 mA 버튼을 누른 뒤 V/A 버튼을 눌러 전압을 결정한다.
- ( + , - )버튼으로 알맞은 전압수를 맞춰준다.
- run 버튼을 눌러준다.⑥ loading된 sample 들이 밑에서 약 0.5cm정도까지 내려오면 pause 버튼으로 작동을 멈춰준다.
⑤
염색
- Gel 전체를 염색 시켜 준다.
① loading이 끝난 Gel을 유리판에서 떼어내 그릇에 담고 적당량의 Staining solution을 부어준 다.
② 교반기(plate mixer)로 교반 해주면서 약 20분가량 염색 시킨 후 따라 낸다.
⑥
탈색
* 염색 되어 나타난 밴드가 잘 보이도록 밴드(단백질 부분)을 제외한 그 외 Gel에 염색된 부분을 탈색시켜준다.
- Destaining solution을 Gel이 잠길 정도로 부어준다.(그릇 표면에 Gel이 붙어있을 경우 흔들어 띄어준다.)
- plate mixer로 교반 시켜준다.
- 교반 중간 중간 마다 Destaining solution을 갈아준다.
- 밴드 외의 Gel부분이 투명해 질 때까지 탈색 시켜준다.(약 40~1시간)
- 끝나면 사진을 찍어 밴드를 확인한다.
- Gel 보관은 5% acetic acid에 담가 냉장고에서 한다.
Result
band 1
band 2
시료의 종류
1. Marker
2. BSA + Cone 알부민
+ -galactosidase
3. BSA + -galactosidase
4. BSA
5. Cone 알부민
6. -galactosidase
7. Glycine
시 료
-galactosidase
BSA
Cone 알부민
Glycine
분자량
119kDa
99kDa
80kDa
75kDa
마 커
①
Myosin
②
-galac
tosidase
③
BSA
④ Ovalbumin
⑤
Carbonic anhydrrase
⑥ Soybeen
trypsin
inhibitor
⑦ Lysozyme
⑧
Aprotinin
분자량
208kDa
119kDa
99kDa
52kDa
37kDa
28kDa
19kDa
6kDa
Discussion
분 석
band 1
band 2
1. Marker
마커가 충분히 내려오지 못하고 위쪽으로 몰려있다.
2. BSA +
Cone 알부민 +
-galactosidase
세가지 물질을 섞어 로딩하였는데 두 번째로 나온 BSA가 번져 2개의 띠인 것처럼 나왔다. 순서는 -galactosidase, BSA, Cone 알부민 순이다.
3. BSA +
-galactosidase
시료의 손실이 있었던 것으로 보인다. 그래도 약하게나마 마커의 3번째 위치에 BSA가 걸린 것이 확인 되었다.
4. BSA
한 가지 물질을 넣었는데 여러 가지 물질이 나온 것으로 보아 이물질이 들어가지 않았나 의심이 된다.
5. Cone 알부민
Cone 알부민은 분자량이 80kDa인데 분자량이 99kDa인 BSA의 약간 아래쪽으로 나온 것이 확인되었다.
6.-galactosidase
6번 역시 시료의 오염이 의심된다. -galactosidase가 나와야 하는 자리에는 걸리지 않고 다른 물질이 다른 분자량에 걸려있는 것을 확인 할 수 있다.
7. Glycine
7번 역시 시료의 오염이 의심된다. 또한 시료의 손실 또한 일어난 것 같다. 그러나 분자량이 99kDa인 BSA와 분자량이 52kDa인 Ovalbumin 사이에 Glycine이 걸려 있는 것이 희미하게 보인다.
비 고
- 2개의 gel의 로딩은 같은 조건에서 동일하게 일어났으므로 밴
드 1과 2의 모양은 같게 나온다.
- 전체적으로 로딩 시간이 짧아 시료가 충분히 내려오지 못했다.
Reference
- http://rafael.ucsf.edu/2DPAGEhome.html
- http://donatello.ucsf.edu/
- http://board.cgiworld.net/view.cgi?id=molgene&now=4&jd=-1&ino=58&tmp_no=61
- 유기화학실험 박원규 저 형설출판사
- 유기화학실험 조철영 저 동화기술

키워드

SDS,   전기영동,   단백질,   분리