Plasmid DNA purification & Electrophoresis

목차

1. 제목(subject):
2. 재료 및 기구(Material and Apparatus):
3. 실험방법(Methods):
4. 실험결과(Results):
5. 고찰(Discussion):

본문내용

제목(subject):
Plasmid DNA purification & Electrophoresis
재료 및 기구(Material and Apparatus):
배양액, cell resuspension buffer, cell lysis buffer, neutralization buffer, wash buffer, elution buffer, pipette, eppen tube, centrifugator, loading dye, spin column,
실험방법(Methods):
저번 시간에 만들어 놓은 배양액 흔들어서 가라 앉은 DNA를 잘 섞은 후, 1.6ml를 eppen tube에 넣고 centrifugation을 12000rpm에서 1분 동안 한다.
위에 뜨는 배지(상등액)를 제거 한 후, cell resuspension buffer 250㎕를 넣고 pellet을 완전히 풀어준다.
cell lysis buffer 250㎕를 넣고 4~6번 뒤집어 섞는다.
neutralization buffer 350㎕를 넣고 4~6번 뒤집어 섞는다.
centrifugation을 12000rpm에서 10분 한다.
상등액을 spin column에 옮긴다.
centrifugation을 60초 동안 한 후, flow-through를 버린다.
wash buffer 750㎕를 넣고 centrifugation을 60초를 한 후, flow-through를 버린다.
centrifugation을 1분 동안 한번 더 하여 남은 wash buffer를 제거한다.
1.5ml eppen tube에 column을 옮긴다.
elution buffer 50㎕를 넣고 1분 동안 두었다가 centrifugation을 1분 한다.
상등액을 제거 한 후 loading dye 1㎕을 넣는다.
pipette으로 살살 섞어 준 후, 전기영동버퍼에 넣는다.
전기영동을 한다.
실험결과(Results):
실험 4번 과정을 한 후 eppen tube 사진 입니다. Cell lysis buffer를 넣었을 때 투명했던 용액이 neutralization buffer를 넣은 후 하얗게 응고된 물질이 생겼습니다. 처음에 이 버퍼를 넣었을 때 두 층으로 나뉘는 흰색 띠가 생겼었는데 섞으니 이렇게 뿌옇게 되어서 정말 신기했습니다.
왼쪽 사진은 실험 9번 과정을 한 뒤의 모습입니다. 교수님께서 설명해 주실 때 spin column 안을 보면 하얗게 걸러진 것을 볼 수 있다고 하셨는데 실제로 실험을 해 보니 정말 하얗게 걸러져서 실험이 잘 되고 있다는 것을 알 수 있었습니다.
마지막 세 번째 사진은 전기영동을 한 후의 사진 입니다. 저희 조는 가장 왼쪽에 있는 전기영동 사진 결과 입니다. 전기영동 결과가 잘 나오지 않을 까봐 기준보다 많은 양을 넣어서 인지 뚜렷하게 잘 나와 있었고, 크기마다 잘 분리된 결과가 나와서 뿌듯하고 좋았습니다.

키워드

DNA,   Electrophoresis,   플라스미드DNA