목차
결 과 예 측
Southern blotting 응용의 예
실험과정의 유의점
Southern blotting 응용의 예
실험과정의 유의점
본문내용
- 결과예측
1) 제한효소 EcoRI , BamHI이용하여 genomic DNA 절단시
5`-overhang cohesive (sticky) end - ex) EcoR I
2) Labeling된 probe를 넣어준후 hybriding시키면 이것이 membrane상에서 상보적인 서열을 갖는 특정 DNA과 혼성화하게 되고 다양한 방법(x-flim or autoradiography)으로 DNA를 확인 할 수 있다.
- 실험과정의 유의점
1kb 이하의 작은 크기의 DNA는 0.7% 의 gel로부터 약 1시간 이내에 쉽게 이동되나 더 큰 크기의 DNA의 이동은 속도가 늦고 그 효율도 떨어지게 된다.
해결법 : DNA를 이동시키기 전에 부분적으로 가수분해 시킨다. 즉 DNA를 약산에 노출시키게 되면 부분적으로 depurination 현상이 일어나게 되며 다시 염기에 노출시키면 변성된 곳의 phosphodiester bond의 DNA골격이
1) 제한효소 EcoRI , BamHI이용하여 genomic DNA 절단시
5`-overhang cohesive (sticky) end - ex) EcoR I
2) Labeling된 probe를 넣어준후 hybriding시키면 이것이 membrane상에서 상보적인 서열을 갖는 특정 DNA과 혼성화하게 되고 다양한 방법(x-flim or autoradiography)으로 DNA를 확인 할 수 있다.
- 실험과정의 유의점
1kb 이하의 작은 크기의 DNA는 0.7% 의 gel로부터 약 1시간 이내에 쉽게 이동되나 더 큰 크기의 DNA의 이동은 속도가 늦고 그 효율도 떨어지게 된다.
해결법 : DNA를 이동시키기 전에 부분적으로 가수분해 시킨다. 즉 DNA를 약산에 노출시키게 되면 부분적으로 depurination 현상이 일어나게 되며 다시 염기에 노출시키면 변성된 곳의 phosphodiester bond의 DNA골격이
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