플라스미드 추출과 전기영동

본문내용

ffer를 넣고 윈심분리 전 1분간 기다리는 과정에서 생긴
차이일 것이다. 우리 조는 항상 마지막에 시료를 받았기 때문에 충분한
반응시간이 없었을 것이다(다음 단계로 다 같이 넘어가기 때문에)
- 또 다른 이유가 있다면 우리 조의 시료가 가장 먼저 Gel에 주사되었기
때문일 것이다. 시료가 Gel에 퍼질 시간이 충분하여, 제대로 된 밴드를
형성하지 못했을 것이다
- 참고 자료
겔전기영동 [Gel electrophoresis]
DNA나 RNA, 단백질과 같은 큰 분자들을 전기적인 힘을 이용하여 겔에서 이동시켜 크기에 따라 서로 분리하는 기술이다.
겔은 콜로이드(colloid) 용액이 굳어진 상태를 말하는 것이다. 전기영동이란 말은 전기적인 힘에 의해 전하를 띤 입자가 이동하는 것을 가리키는 표현이다. 따라서 //겔전기영동은 전류를 흘려주어서 전하를 가진 입자가 겔 내부에서 이동하여 분리되도록 하는 기술//이다. DNA나 RNA의 경우 주로 아가로즈(agarose)를 사용하고, 단백질의 경우 폴리아크릴아마이드(polyacrylamide) 등을 굳혀서 겔을 만든다. 구조나 크기 등 입자의 성질에 따라서 겔을 통과하여 이동하는 속도가 달라지게 된다.
겔에 홈을 만들어 DNA나 RNA, 단백질 등의 분자를 집어넣고 전류를 흘려주면 음전하를 띤 이들 분자들은 전기적인 힘에 의해 겔 안에서 이동하게 된다. 같은 크기를 가진 분자들은 하나의 집단을 형성하여 움직이게 되는데 만약 수조개의 동일한 분자들을 전기영동하였다면 겔을 염색하였을 때 이것이 하나의 띠 모양으로 나타나는 것을 확인할 수 있다. 작은 분자는 큰 분자에 비해 빠른 속도로 이동하기 때문에 결과적으로 서로 다른 크기의 분자들은 겔 상에서 서로 다른 위치에서 띠 모양을 나타내게 된다.
//각각의 띠를 이루고 있는 분자들의 크기는 이미 크기를 알고 있는 분자들을 나란하게 전기영동하여 겔 상에 나타난 띠의 상대적인 위치를 비교함으로써 그 크기를 측정할 수 있다//
전기영동은 이와 같은 원리를 이용하여 분자량 결정을 비롯하여 등전점이나 순도결정, 각 성분의 정량, 정제 등에 이용되고 있으며, 단백질이나 핵산의 주된 분리분석법이 되고 있다.
*DNA의 이동 속도에 영향을 주는 요인
1. DNA의 크기
2. DNA의 형태 (속도 : 초나선 환상>열린환상>선형)
3. Agarose의 농도 (0.8%/1%/2%-PCR)
4. 전압의 세기
5. Buffer의 조성(TAE buffer)
*Alkaline Lysis
1. NaOH로 시료를 처리하면 세포가 파괴되고, DNA염기쌍의 수소결합이
파괴(denaturation), 단일가닥DNA로 되고, 작은 조각으로 잘린다
2. Potassium acetate로 중화시키면, 공유결합으로 연결되어 잘리지 않은
Supercoiled Plasmid는 다시 이중나선 구조로 결합(renature)되어
상등액에 남고, 세균 DNA는 잘려진 Linear DNA가 되어 단백질과 같이
Potassium과 SDS간에 형성되는 Complex 속에 갇혀 침전된다(원심분리시)

키워드

플라스미드,   전기영동,   플라스미트추출