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★전체적인 principle
1. Western blotting의 기원과 특징
단백질 전기영동은 세포 내의 개개의 단백질 성분을 분리하는 기본적인 기술이다. 하지만 특정 단백질만을 순수하게 검출할 수 없기 때문에 새로운 기술이 요구되었고 이러한 요구에 부응하여 1979년에 Towbin이 western blotting을 개발했다. 이 기술은 전기영동을 한 polyacrylamide gel로부터 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 항체를 이용하여 특정 단백질만을 검출하는 방법이다. 가장 먼저 준비된 sample을 SDS-PAGE를 통해 단백질들을 분리하고 이 단백질들을 membrane으로 옮기는 과정을 통해 membrane으로 옮겨진 단백질은 항체를 이용하여 검출할 수 있다. 이번 한동대 단백질 분리 정제 실습에서는 단백질 중에서 특별히 베타-actin과 pERK를 확인하고자 한다. 특별히 베타-actin은 house keeping protein으로서 어떤 종에서도 같은 양으로 나타나기 때문에 실험을 판단할 수 있는 기능을 하며 ERK는 phosphorylation되면 activation되는 단백질이다.
1. Western blotting의 기원과 특징
단백질 전기영동은 세포 내의 개개의 단백질 성분을 분리하는 기본적인 기술이다. 하지만 특정 단백질만을 순수하게 검출할 수 없기 때문에 새로운 기술이 요구되었고 이러한 요구에 부응하여 1979년에 Towbin이 western blotting을 개발했다. 이 기술은 전기영동을 한 polyacrylamide gel로부터 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 항체를 이용하여 특정 단백질만을 검출하는 방법이다. 가장 먼저 준비된 sample을 SDS-PAGE를 통해 단백질들을 분리하고 이 단백질들을 membrane으로 옮기는 과정을 통해 membrane으로 옮겨진 단백질은 항체를 이용하여 검출할 수 있다. 이번 한동대 단백질 분리 정제 실습에서는 단백질 중에서 특별히 베타-actin과 pERK를 확인하고자 한다. 특별히 베타-actin은 house keeping protein으로서 어떤 종에서도 같은 양으로 나타나기 때문에 실험을 판단할 수 있는 기능을 하며 ERK는 phosphorylation되면 activation되는 단백질이다.
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