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형질전환)이란 유전자가 삽입된 plasmid vector를 대장균 세포 속으로 도입하는 과정이다.
- Transformation에 있어서 large DNA은 small DNA 보다 효율이 떨어지며 DNA의 양이 너무 많아도 좋지 않으므로 적당한 길이와 양의 DNA을 사용 하는게 중요하다.&nb
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대장균의 형질전환
LB 액체 배지, 고체 LB plate 배지, PGEM T-Easy plasmid vector- Yes, Amp resistance, pDR274 plasmid vector-NO, Amp resistance, JCompetent cells, Ice,Water bath, Floating rack,Micropipette, Yellowtip, 알코올램프, spreader, Inoculation loop
2) Plasmid DNA 분리
Escherichia coli in L
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유전자(혹은 특정 염기서열을 갖는 DNA 조각)를 어떤 생물로부터 분리하여 플라스미드(plasmid)나 파아지 운반체(phage vector)에 삽입시켜 재조합 DNA(recombinant DNA)를 만들 수 있다. 이를 숙주세포에 도입하여 대량 배양하여 운반체를 추출 분리하면
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1. 실험 결과
가. E. coli 배양 결과 사진
실험 결과 다음과 같이 E.coli colony가 생성되었다. 중앙 부분에는 주로 blue colony, 테두리 부분에는 주로 white colony가 분포하고 있는 것을 확인할 수 있었다.
나. E. coli colony 분석
White colony의 개수가
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형질전환이 일어났음을 알 수 있는데, 그 이유는 A항생제가 투여된 LB배지에 항생제 저항성 플라스미드를 가지고 있는 형질전환체가 항생제 저항성 유전자를 발현시켰기 때문이다.
7. 참고문헌
-강의 ppt자료
-네이버 백과사전(마이크로 피펫,
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된 대장균에 plasmid DNA를 넣는 방법으로는 chemical method이 있는데 Chemical method는 보통 CaCl2를 사용하여 대장균 세포막의 DNA 투과성을 증가시키는 방법이다. 전기영동으로 알아보는 뿐만 아니라 이렇게 실험해서 결과를 알아보고싶다.
원심분리
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형질전환을 시킬 수 있다.
-Bacterial culture-
본 실험에서는 앞서 실험한 transformation된 cell을 배양했는데 colony가 거의 발견 되지 못하였다. DH5a cell은 대장균의 competent cell 종류 중에 하나인데 이러한 competent cell이 LB plate에서 자라지 못한 이유를
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1944년 에이버리, 맥리오드, 매카티의 획기적인 실험결과로서 R형 세균을 S형 세균으로 형질전환시킨 물질은 DNA임을 증명 했다.
3. 1952년 허쉬와 체이스는 T2 바이러스를 장내 세균인 대장균에 감염시키는 연구를 수행하였다.
[참고문헌]
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Plasmid vector
Gene cloning에 Plasmid vector가 사용되는 이유
1) 세포 내에서의 자가복제(self-replication)기능
박테리아 세포 내에는 박테리아가 고유하게 가지고 있는 chromosomal DNA는한 세포당 하나밖에 있을 수 없다. 그런데 vector는 복제하여 수많은 cop
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lin 100 ㎍/mL
③ 50 mM CaCl2, LB medium, Eppendorf tube, Microcentrifuge, Pipette, Tip, Water bath, Ice bath, 37℃ Incubator
(6) 참고 문헌
①http://genetics.hannam.ac.kr/lecture/GELab2002/GELAB23-transforamtion.htm
②http://home.pusan.ac.kr/%7Emolbio99/biology-TF.htm
③http://kin.naver.com/browse/db_det
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