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전기영동
어떤 분리기법의 분리력은 만약 검출 또는 가시화의 어떤 특이한 형태로 병합된다면 크게 개선될 수 있으며 그 일례가 면역 전기영동(immunoelectrophoresis)법이다. 한천 겔(agar gel)의 얇은 층을 유리판에 부착시키고 시료를 전기영동 시
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gel의 polymerization 과정을 설명하라.
1R-4. 0.8%의 Agarose gel을 사용하여 크기는 같지만 여러 가지 다른 형태의 DNA를 분석하려고 한다. DNA가 circular covalently closed(Supercoil)형태, Open circular형태, Linear형태로 되어있을 때 예상되는 전기영동 거리를 설명
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Agarose-gel 전기영동
실험목적
종류가 다른 DNA 단편을 agarose-gel 전기영동을 통해서 크기를 분석하고, agarose-gel 전기영동 장치의 사용법을 알아본다.
이론 소개
≪ 사 진 ≫
DNA의 정의
≪ 그 림 ≫
DNA의
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Electrophoresis kit
3. 실험 방법
① 1% agarose gel을 준비한다.
0.5X TAE 50ml에 0.5 g을 넣고 끓인 후, 틀에 붓고 30분간 굳힌다.
② DNA 용액 10ul에 6X loading dye 2ul를 섞어 gel에 loading 한다.
lane 1 : Size marker
lane 2-n : DNA
③ 전기영동 100V, 40분
④ EtBr 용액에 gel을 2
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DNA를 동시에 전기영동 시켰을 때 그 위치가 Size marker의 전기영동 밴드의 어느 위치쯤에 있는가 보고, 자신의 DNA 크기를 알 수 있다.
자신이 보고자 하는 DNA의 사이즈에 따라 알맞은 bp지수를 가진 Size marker를 사용하면 오차를 더욱 줄일 수 있
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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전기영동 이동거리로 분석한 결과와 일치한다.
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다
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ygote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개
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