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실험목적
제한효소에 의해 잘라진 필요한 부분의
Insert와 Vector의 결과를 전기영동을
통해 확인한 후 Ligase를 통해서 Insert
와 Vector를 붙여주는 것이 목적.
실험원리
Ligation
DNA나 RAN의 끈을 이어주는 과정을
가리키는 용어이다.
이 반응에
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아닐 경우 세포 내의 고유 DNA일 가능성도 배제할 수 없다. 1.PCR
-PCR에 쓰인 재료의 역할
-PCR과정
-PCR시 고려사항
2.전기영동
-전기영동 과정
3.Ligation
-Ligation 과정
4.Transformation
5.Plasmid seperation
6.Enzyme cutting
7.최종결과
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라이제와 슈퍼옥시드 디스뮤타아제의 2종류의 효소를 갖고 있고 과 산화수소를 무독한 상태로 바꾸어 버린다.
H2O2 +H2O2 ⇒ 카탈라아제 ⇒ 2H2O + O2
H2O2 + NADH +H+ ⇒ 슈퍼옥시드 디스뮤타아제 ⇒ 2H2O +NAD+ 1. 제한효소
2. 온도
3. 빛
4. 압력 : 대
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가 관찰 되는데 이것은 EcoR I 제한효소가 벡터로부터 DNA를 양쪽에서 잘라 작은 조각이 전기영동 된 것이다. 또한 500bp가 DNA의 크기일것이라고 추측해 볼수 있다. Table 1에서 추측해 본 것과 같이 3번에서 두줄이 발견됨으로써 라이게이션이 잘되
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게 되므로 사용할 제한효소 선택이 해석 결과를 좌우한다.
d. Pulsed-field gel electrophoresis (PEGE)
PEGE는 거대한 DNA사슬을 영동하는 방법으로 개발되었다. 일반적으로 20kb를 넘는 크기의 DNA 단편을 전기영동으로는 분리다 아주 어렵다. 또한 긴 DNA 사
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