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Southern blotting 결과 제 1 장 서론
제 1 절 실험목적
제 2 장 실험방법
제 1 절 Culture condition
제 2 절 Agarose gel electrophoresis
제 3 절 Southern blotting
제 4 절 Southern hybridization
제 5 절 SDS-PAGE
제 6 절 Western blotting
제 3 장 Materials and Methods
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Agarose gel
2.1. 이론적 배경
2. 2. 제조 방법
3. Southern hybridization
3.1. 이론적 배경
3.2. 실험 방법
4. Western hybridization
4.1.1. SDS Polyacrylamide Gel electrophoresis
4.1.2. 이론적 배경
4.1.3. 실험방법
4.2.1. Western blotting
4.2.2. 이론적 배경
4.2.3 실험방법
5 E
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방법들도 존재한다. 어떤 방법들이 있는지 설명하라.
2R-4. Chromosomal DNA와 같이 분자량이 큰 DNA들은 일반적인 Agarose gel에서 분리하기가 힘들다. 이 때 orthogonal field alternation gel electrophoresis (OFAGE)가 사용되는 데 이 전기영동법을 설명하라.
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agarose gel electrophoresis에 의해 분리한다.
변성된 DNA를 nylon membrane 에 흡착시킨다.
방사성 동위원소로 표지된 probe로 hybridization시킨다.
X선 필름에 노출시켜 감광된 band를 확인하여 DNA의 존재를 밝혀낸다.
Southern의 목적
Southern blot analysis를 이
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agarose gel electrophoresis
4. Result
5.Discussion
(1)실험 과정에 대한 고찰
(2)Vector의 경우 3개의 band로 나왔는데, 아래로부터 CCC(covalently closed circular), Nicked, Linear form으로 왜 이동성의 차이가 발생하는지 각각의 구조와 연관지어 설명하세요.(band
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전기영동 이동거리로 분석한 결과와 일치한다.
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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