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, 이들을 전기영동하면 같은 염기서열의 같은 크기
DNA라도 이동하는 거리가 제각기 다릅니다.
Size marker로 쓰는 짧은 DNA는 linear form입니다.
이렇게 전기영동으로 size를 비교할 수 있는 DNA는
linear form DNA 뿐입니다. Alkali lysis method
miniprep
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Alkali lysis method).
② 정제한 Plasmid에 원하는 insert가 있는지 확인하기 위해 insert의 가장자리에 위치한 제한효소를 처리한다.
③ 이것을 Gel 전기영동을 하여 insert와 Vector의 크기를 확인한다. 하지만 이것이 전기영동에서 우리가 원하는 insert DNA
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Ethanol : 2 ~ 2.5 volume
final 0.3 M sodium acetate, pH 5.2 :
commonly used
final 0.2 M sodium chloride
DNA containing SDS
final 2 M ammonium acetate
triphosphate removal
inhibits T4 polynucleotide kinase and TdT
final 0.8 M lithium chloride
RNA precipitation, very soluble in ethanol
i
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가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method
기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것입니다.
miniprep에 사용되는 solution ◦Minipreparation
-원리
-sol1,2,3의 성분&역할
◦Ph
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method에는 alkali lysis법, boiling법, 효소 분해법 등이 있다.
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 균주를 배양하면, 플라즈미드를 갖고 있는 형질전환 균주는 항생물질
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