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DNA 농도 측정 & DNA gel electrophorosis
2.
재료
및
기구 기구 1) Plasmid DNA 분리
centrifuge, e.p tube, column(max 750ul), conical tube, pipette, vortex, collecting tube
2) DNA 농도 측정
UV-Vis Spectrophotometer, Cuvette, pipette, e.p tube, TE 완충용액
3) DNA electrophoresis
Mini gel
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1. 운반체로서의 plasmid란 무엇인가?
2. 분자유전학적 관점에서의 plasmid의 용도와 그 기능을 간략히 서술하시오.
3. Plasmid 구조(형태)에 대해 서술하시오. (그림포함)
4. 자신의 DNA gel 사진을 첨부하시오.
5. Gel 사진을 보고 Uncut DNA, Vector, I
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plasmid DNA는 20℃에서 보관한다.
3) 전기영동
①Well의 왼편에 size maker를 5ul 넣고 다음 well부터 차례로 loadingdye와 섞은 DNA를 넣는다. (20ul loading)
②전기영동장치의 플러그를 전력공급장치에 연결한 후, 전기를 걸어 20~30분간 전기영동을 한다.
③
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DNA를 보호할 수 있습니다.
DNA가 눈에 보이기도 하고 양이 적으면 잘 보이지 않기도 합니다. 그러나 상당히 순수한 plasmid DNA가 분리되었습니다.
Supercoiled(closed circular) DNA와 open circular DNA
분리한 DNA를 그대로 전기영동하면 사진과 같은 결과를
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DNA 절편은 1974bp의 우리가 얻어내고자 했던 DNA 절편임을 알수 있다.
Referance: 1. Title: MINIPREPARATION을 위한 시약 만들기
2. Title: 제한효소(EcoR 1, Nco1)를 이용한 DNA 절편 절단과 전기영동
3. Title: 순수한 DNA plasmid 추출(minipreparation)
4. Recovery
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DNA에 오염되었나, 즉, DNA의 순도를 확인할 수 있는데 실험 결과 A260/A280의 비는 0.957로 순수한 DNA로 여겨지는 1.8보다 훨씬 작다. 따라서 DNA에 단백질이 불순물로 많이 섞여 있다고 결론지을 수 있다.
전기영동을 이용하여 단백질과 DNA의 크기를
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전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의 밴드만 나타냈기에, 따라서 자식 오염주는 4번이다.
또한 멜론 샘플들의 순도는 80%임을 알 수 있었고, 멜론 종자의 순도검정시 DNA mar
ker를 이
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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plasmid의 lac gene에 잘 삽입이 되면 lac fragment가 만들어지지 않아서 x-gal이 분해되지 않고 white를 띈다. 또, ligation 할 때, vector와 DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1이 아니라 길이, molar 농도를 참고 해서 맞춰야 한다. ligation이 잘 되
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DNA염기쌍의 상보적 결합, 그 결합의 종류
♦ 반응속도에서 온도의 영향
♦ 유전자와 유전체의 차이, 액화천연가스(LPG)의 구성성분
♦ 화학반응은 첫 번째로 어떤 것이 일어나는가?
♦ 플라스틱pet의 full name은 무엇인가?
♦ 1
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