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1. 운반체로서의 plasmid란 무엇인가?
2. 분자유전학적 관점에서의 plasmid의 용도와 그 기능을 간략히 서술하시오.
3. Plasmid 구조(형태)에 대해 서술하시오. (그림포함)
4. 자신의 DNA gel 사진을 첨부하시오.
5. Gel 사진을 보고 Uncut DNA, Vector, I
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enzyme digestion을 하되, 이 방법이 사용 불가능할 경우는 single digestion 방법을 사용하시오. enzyme 선택의 이유도 제시하시오.
4. Transformation 후, screening 과정을 거처 bacterial colony로부터 plasmid를 추출했을 때, 이 recombinant DNA가 제대로 된 insert를 가
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DNA의 변성(denaturation)
② Primer의 결합(annealing)
③ DNA의 합성(polymerization)
4) PCR의 산물의 전기영동(electrophoresis)
PCR product purification
Ⅱ. 얻은 유전자를 vector에 삽입
1) Vector
※ Vector의 기능
※ Vector의 종류
2) Restriction enzyme
※ Recombinant D
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Plasmid DNA의 추출과 Restriction enzyme에 대한 결과를 동시에 확인할 수 있는 실험이었습니다. 1. 완충액(Buffer)의 조제 (0.05M 구연산 완충액)
2. BRADFORD 시약을 이용한 단백질 정량
3. Plasmid purification by spin column (Miniprep)
4. Plasmid DNA digestion by R
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enzyme
(5) topoisomerase
3) 제한효소의 종류와 절단부위
4) 제한효소를 이용한 DNA의 절단시 고려할 사항들
5) 대표적인 DNA절단 제한효소와 절단 인식자리
6) 전기영동(electrophoresis)
(1) 전기영동의 정의와 원리
(2) 완충액
(3) Gel loading buffer
(4) DNA의 가
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전기영동 이동거리로 분석한 결과와 일치한다.
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다
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영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
1㎕
5' primer
1㎕
3' primer
1㎕
DW
17㎕
total
20㎕
<
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기본 원리
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p746-748
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p748 Abstract
Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
Discussion
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