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vector는 무엇인지, 그리고 마지막에 plasmid map을 작성한다. Ⅰ. 원하는 유전자준비
1) GeneBank에서 유전자 검색
2) Genominc DNA분리
3) Polymerase Chain Raction(PCR)
* PCR에서 필요한 재료
* PCR 의 원리
① DNA의 변성(denaturation)
② Primer의 결합(annealing
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Vector란 무엇이며 어떤 역할을 하는가
1) 세포 내에서 자가복제(self-replication) 을 한다.
Vector로 쓰는 DNA들은 세포 내에서 자가복제를 한다.
박테리아 세포 내에는 박테리아가 고유하게 가지고 있는 chromosomal DNA가 있다. 한 세포당 하나밖
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왔다. 저항성 닭으로 계량하기 위해 많은 연구가 필요하다 <유전자 재조합 기술 >
1. 미생물
2. 고등생물
3. 기본적인 재조합 과정
4. Vector
5. 제한 효소
6. 중합효소 연쇄반응과 응용
<< 유전공학의 이용 >>
1. 미생물
2. 식물
3. 동물
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DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다. intro..
형질 전환(transformation)
Vector
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Enzyme으로 절단된 vector의 경우 self-ligation 으로 인하여 외래 DNA가 삽입되는 효율이 매우 낮다. 이 경우 어떻게 하면 외래DNA를 쉽게 삽입시킬 수 있을 지 의견을 제시해 보라.
: 양 말단이 동일한 제한효소 부위를 가지는 DNA경우 vector의 양말단도
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vector와 DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1이 아니라 길이, molar 농도를 참고 해서 맞춰야 한다. ligation이 잘 되었는지 확인하기 위해서는 cloning 까지 마쳐야 한다. cloning이 금방 끝나는 것이 아니라 오래 걸린다. 또, 제대로 colony가
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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