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Restriction enzyme에 대한 결과를 동시에 확인할 수 있는 실험이었습니다. 1. 완충액(Buffer)의 조제 (0.05M 구연산 완충액)
2. BRADFORD 시약을 이용한 단백질 정량
3. Plasmid purification by spin column (Miniprep)
4. Plasmid DNA digestion by Restriction enzyme
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buffer, protein의 비율이 일정하지 않은 점 또한 오차가 발생 할 수 있는 원인이라고 이야기 할 수 있다.
8. 참고문헌(Reference)
Activity
- Lehninger Principles of biochemistry, David L.Nelson/Michael M. Cox, 월드 사이언스, 2014, 95-96p
단백질 정량
- biochem.yonsei.ac.kr/boar
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단백질을 정량하기 위한 과정은 크게 cell harvest, cell lysis를 진행한 뒤 Bradford assay와 같은 정량법을 통해 sample내 단백질 농도를 파악하는 것이다. 먼저 Cell harvest한 후 저속 rpm으로 원심분리하여 pellet에 모인 cell을 풀어준 뒤 lysis buffer를 처리한
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Buffer
2). 세포의 파괴와 분획
3). 단백질의 가용화 법(막단밸질의 가용화 방법)
4). 단밸질 정량법(Bradford 법)
5). Polyacrylamide gel
(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis;SDS-PAGE)
6). 단백질의 염색
4. Procedure
5. Content of solutions & 그 용도
6. 실
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단백질간의 반응 변이차가 거의 없고 시약이 한 개만 필요하다는 것이다. 하지만 단점으로는 37℃나 상온에서는 반응이 완전하지 않으므로 많은 양의 단백질 정량 시에는 문제가 되며 농축된 단백질의 경우는 희석이 필요하고 반응시간이 40
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