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장에서 살 수 있는 반찬통이 적합)에 옮기고 staining solution을 붇는다
2. Shaker에 올려놓은 후 30분-1시간 염색 한다 (전반적으로 gel이 파랗게 보이고 단백질 밴드가 좀 더 진하게 보이는 상태가 가장 좋다).
※주의 : staining/ destaining 용액에는 과량
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서 이동속도가 단백질과 비슷해 같이 움직이며 파란색을 띠게 하는 역할을 한다.
단백질은 아미노산으로 구성되며, 아미노산에는 총 20종류가 있는데, 20여종의 아미노산은 각각 아미노기(-NH2)와 카르복실기(-COOH)를 가지고 있으며, 측쇄(side cha
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단백질 같은 불순물이 있다는 것을 의미한다.
3) Agarose gel 상에서의 전기영동.
동물의 세포로부터 분리한 RNA를 agarose gel에서 전기를 걸어 분리하면 UV하에서 band의 밀도를 통해 농도를 알 수 있으며, standard marker와의 비교를 통해 크기를 분
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전기영동 시 사용 한다.
SDS-PAGE Running Buffer
주로 단백질을 크기 별로 분리시 SDS-PAGE를 할 때 사용, Glycine에 의해 크기 별 분리 가능, SDS에 의해 단백질의 변성된 형태로 이동 유지
SDS-polyacrylamid gel electrophoresis
전하를 가지며 단백질의 소수성 영
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전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질 들과 같은 하전된 물질들을 분리하거나 분석하는 데 매우 효과적인 수단으로 이용된다.
Acrylamide gel은 DNA 또는 단백질의 전기영동에 이용될 수 있는데, 특히 단백질의 경우는 SDS (sodium dodecyl sulfa
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단백질이 얼마나 DNA에 오염되었나, 즉, DNA의 순도를 확인할 수 있는데 실험 결과 A260/A280의 비는 0.957로 순수한 DNA로 여겨지는 1.8보다 훨씬 작다. 따라서 DNA에 단백질이 불순물로 많이 섞여 있다고 결론지을 수 있다.
전기영동을 이용하여 단백
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ote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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전기전자,컴퓨터공학
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