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ommonly used electrophoresis buffers
Buffer
Concentrated stock solution (per liter)
Tris-acetate (TAE)
50x
242 g Tris base
57.1 ml glacial acetic acid
100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
Generally used for agarose EP
Tris-borate (TBE)
20x
121.1 g Tris base
61.7 g boric acid
7.44 g Na2EDTA-2H2O
Generally use
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TBE용액으로 희석하여 99mL에 agarose 0.8g(0.8%)을 섞어서 0.8%로 만든다. 열을 가하여 완전용해 시키고, EtBr을 넣고 잘 섞은 후 뜨거운 용액을 식힌 후 젤을 굳히는 판에 붓고 comb을 꽂고 식을 때까지 기다린다.
2. 잘 섞은 뒤 주형에 넣고 굳혀서 agarose
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기>
1× TBE 용액으로 희석하여 99mL에 agarose 0.8g(0.8%)을 섞어서 0.8%로 만든다. 열을 가하여 완전용해 시키고, EtBr을 넣고 잘 섞은 후 뜨거운 용액을 식힌 후 젤을 굳히는 판에 붓고 comb을 꽂고 식을 때까지 기다린다.
2. 잘 섞은 뒤 주형에 넣고 굳
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ose gel에 loading하여 전기영동한다 (80-100 V로 1시간정도).
5. 1 x TBE 150 ml에 10 mg/ml의 EtBr 용액을 10 μl 넣은 염색용액에 gel을 담근 후 5-30분 후 UV illuminator위에 놓고 관찰한다.
3-1. 면역반응 시 생성되는 항체를 제외하고 반응에 관여하는 물질들은?
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TBE (Tris borate EDTA)
DNA 분자량이 작은 경우, DNA sequencing에 쓰임. (<1 kb)
TBE는 좀 더 오래 사용가능. buffering capacity가 더 좋기 때문.
- gel을 만들 때 사용되는 물질들을 완충용액(Buffer)에 녹여야 한다.
: 일정한 ionization state 를 제공하기 위해서
분
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