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Thermus aquaticus에서 분리한 열에 안정적인 DNA polymerase를 이용함으로서 해결되었다. Thermus aquaticus의 DNA polymerase 는 Taq polymerase로 95℃에서 안정적이고 PCR에서 이용되는 변성과정에 의해 영향을 받지 않는다. Taq polymerase의 사용은 37℃보다는 72℃에
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Thermus aquaticus와 같이 고온에서 번식하는 세균의 DNA polymerase가 사용되면서 반응의 specificity 및 효율이 크게 향상되어 PCR이 널리 이용되는데 결정적인 기여를 하였다. PCR 반응에는 4가지의 deoxyribonucleotides, 2가지의 primer, DNA polymerase, template DNA,
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Thermus aquaticus이며 이 균으로부터 추출된 DNA 중합효소는 그 머리글자를 따서 Taq DNA 중합효소(Taq DNA polymerase), (Taq 또는 Taq 중합효소로 부름)라고 명명되었다. Thermus aquaticus 박테리아는 75℃의 물에서 산다. 이 DNA 중합효소(Taq 중합효소)의 적정온
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체 부피를 50㎕로 넣는다. (Sample × 조성)
2) 혼합된 조성을 잘 섞어준 후에 각각 PCR tube에 정량으로 분주한다.
3) 준비된 DNA template를 sample tube에 넣는다.
4) PCR machine에 넣은 후 입력된 program으로 반응을 진행한다.
<Fig 1. PCR의 일반적인 과정>
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충분히(10분) 주어 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
위 과정이 계속 반복하여 진행되면서(보통 25∼35회) 원하는 DNA 부분을 증폭시키는 것이 PCR 반응의 원리이다.
Taq DNA Polymerase
Taq는 온천에서 사는 Thermus aquaticus라는 균주에서 따온 이
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