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PCR 완충액 5㎕
② 2mM dNTP 5㎕
③ 프라이머 1(25p㏖/㎕) 1㎕
④ 프라이머 2(25p㏖/㎕) 1㎕
⑤ 주형 DNA(약 1㎕ genome DNA)
⑥ 이상의 반응액 총량이 47.5㎕가 되도록 초순수를 가한다.
각 성분을 분취할 경우는 새로운 팁을 사용한다. 복수의 반응을 1회에
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PCR)과 형광물질을 사용하여 DNA를 증폭시키면서 증폭산물을 동시에 검출하는 실시간 중합효소 연쇄 반응 등이 있다.
PCR 증폭효율에 영향요인
① 각 단계의 반응온도와 시간
② cycle 수
③ 반응액 조성(주형 DNA, dNTP 농도 등)
④ primer 설계
⑤
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PCR에 필수적으로 필요한 template나 primer, polymerase, dNTP가 불균형하게 배분되었을 가능성을 생각해 보았다. 그러나 이 경우, 아주 옅게라도 band가 나와야 정상일 것이므로, 두 번째 가능한 원인으로 taq. polymerase의 변성을 생각했다. 이 효소를 첨
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. Washing
5. Elution
-PCR
1. PCR tube에 dNTPs buffer 4 μl와 reaction buffer 5 μl를 넣는다.
2. Template DNA 1 μl를 넣고 forward, reverse primer를 각각 0.5 μl 씩 넣는다.
3. DNA polymerase 1 μl를 넣는다.
4. 증류수 37 μl를 넣고 잘 pipetting 해 준다.
5. PCR machine의 well에 tube를 넣
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1. Title: DNA sample PCR
2. materials: 2㎕ PCR buffer, 0.4㎕ dNTP(0.1㎕ each of dATP dCTP dTTP dGTP), 0.2㎕ primer (10㎕ each of primer, 0.1㎕ Taq polymerase, 16.3㎕ DW, 1㎕ template DNA, micro pipette, tip, micro tube
3. Purpose:
1) ds-DNA separation: high temperature (90도 이상) ss-DNA 로 분
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