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아닐 경우 세포 내의 고유 DNA일 가능성도 배제할 수 없다. 1.PCR
-PCR에 쓰인 재료의 역할
-PCR과정
-PCR시 고려사항
2.전기영동
-전기영동 과정
3.Ligation
-Ligation 과정
4.Transformation
5.Plasmid seperation
6.Enzyme cutting
7.최종결과
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표현되며, 즉 투과율의 음의 상용로그 값으로 정의된다. 일반적으로 물체에 빛을 흡수하는 입자가 많다면 투과되어 나오는 빛의 세기는 줄어들기 때문에 흡광도는 물질의 농도에 영향을 받고, 또 입자가 어느 정도의 빛을 흡수하느냐에 따라
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하기로 하였다.
Fig 13. 용액 1ml를 샘플링해 UV-Vis spectrophotometer로 측정한 흡광도
(4) 두 개의 bottle을 shaking incubator에서 40 ℃, 150rpm으로 반응시킨다.
(5) 10분, 20분, 30분, 40분 총 4번 흡광도를 측정하여 측정한 data를 바탕으로 Abs 405nm/min의 그래프를
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와준다. 이 과정 역시 세게 흔들면 안 되는데 chromosomal DNA가 나오게 되면 앞으로의 과정에서 플라스미드와 따로 분리해 낼 방법이 없기 때문이다. buffer3를 넣어 pH를 7로 복구가 되면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 플라스미드는 비
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이 유전자를 발현할 경우, insulin 단백질을 생산하게 된다. 따라서 이 세포가 생산해내는 단백질을 조사하게 되면 유전자의 도입 여부를 가늠할 수 있다.
ii) 생산된 단백질을 western blotting을 통해 확인하면 insulin 단백질을 확인할 수 있다.
iii)
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pcr 및 SLIC method를 활용한 뒤에 transformation과 IPTG 처리를 배웠습니다. 그 후 Ni-NTA colum 실험과 SDS-PAGE 후 TagX 단백질의 크기를 비교하여 발현 온도에 따른 binding affinity를 비교하는 연구에 참여하여 실험하였습니다.
더불어 연구 과정에 필요한 추
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