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1.Title: 세포 내 DNA colony PCR
2.materials: 2㎕ PCR buffer, 0.4㎕ dNTP(0.1㎕ each of dATP dCTP dTTP dGTP), 0.2㎕ primer (10㎕ each of primer, 0.1㎕ Taq polymerase, 16.3㎕ DW, 1㎕ template DNA, micro pipette, tip, micro tube, colony lysis buffer, 배지에 배양된 세포 1.Title:
2.materials:
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1. title: colony에서 추출한 DNA의 electrophoresis
2.materials: PCR된 MASTER MIX, 전기영동 기기, 전원공급장치, 50 x TAE 용액, 팁(tip), 마이크로피펫(micropipette), loading dye, DNA, size maker, agarose gel
3.purpose: PCR된 DNA template를 전기영동을 통해 PCR의 결과를 확인 할
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colony dilution >
7. Results
8. Discussion
9. Project
① LB 배지에서 NaCl, Tryptone, yeast extract의 역할에 대해 조사하세요. 또는 배지의 종류에 대해 조사하세요.(택1)
② serial dilution의 의미에 대해 조사하세요.
③ streaking and spreading이 무엇인지에 대해
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colony를 slide glass에 도말하여 gram staining으로 염색 후, 현미경으로 관찰한다.(x1000)
⑨ 3~4 종류의 균이 확인되면 각각의 세균의 colony를 1% LB broth가 들어간 3ml liquid medium에 접종한다. 접종한 배지는 37℃ incubator에 넣고 18시간 배양 후, 세균의 유무
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colony가 있다고 가정하면 그 colony는 고인 물에 의해 다른 colony와 섞일 가능성이 생기게 된다. 즉, 미생물 cloning 측면에서 문제가 생기게 된다. 따라서 거꾸로 보관하여 뚜껑 면으로 물이 고이도록 하는 것이다.
· 배지에 균 접종하기 전 무균
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colony를 띄는 것은 gene이 삽입 되지 못하고 self-ligation 되었다. 반면 plasmid의 lac gene에 잘 삽입이 되면 lac fragment가 만들어지지 않아서 x-gal이 분해되지 않고 white를 띈다. 또, ligation 할 때, vector와 DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1
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