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영양 생화학 실험
1. 주제 RT(Reverse Transcription)-PCR , PCR (polymerase chain reaction)
2.
재료
및
기구 기구 PCR, mini centri, PCR tube, e.p tube, incubator, micro pipette, glove, ice box.
시약 1) RT-PCR
DEPC, RNA sample, oligo dT, RT buffer, dNTP, RT enzyme., Thermal Cycler
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dNTP를 처리하면, dNTP가 complementary한 DNA template와 binding한다. 이를 fluorescent microscope를 통해 촬영하면, 각 template가 fluorescent dot으로 보이게 되므로, 각 spot의 색을 보고 해당 nucleotide의 base를 읽는다. chip을 wash하여 dNTP에 붙어있던 형광과 3’block을
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dNTP, 완충액, 염화마그네슘(MgCl2)이다. 주형이 되는 DNA로는 보통 20~100ng의 DNA를 사용하며, 시발체는 보통 20~30개의 염기로 이루어지도록 디자인하며 A, T와 G, C의 비율은 동일한 비로 이루어진 것이 좋다. 또한 G, C의 분포는 몰려 있지 않는 것을
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th of time they are applied in each cycle depend on a variety of parameters.
사용되는 온도와 이들의 각 주기에 적용되는 시간의 길이는 다양한 매개 변수에 의존한다.
These include the enzyme used for DNA synthesis, the concentration of divalent ions and dNTPs in the reaction, and the m
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PCR 반응 혼합물의 제조
1) 반응 혼합물의 양
- 최종 반응액은 10, 25, 50, 100 등으로 조절할 수 있으며 증류수(DW)는 최종
반응액의 양에 따라 결정한다.
2) dNTP
- dATP, dTTP, dGTP, dCTP가 각각 2.5mM이 되도록 혼합한다.
- 서로의 농도가 틀리면서 잘못 들어
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