Lowry protein assay (단백질 정량 분석) 실험_결과레포트 [A+]

소개글

Lowry protein assay (단백질 정량 분석) 실험_결과레포트 [A+]에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result & Discussion
4. Conclusion
5. Reference

본문내용

아지며, 청색이 진해진다는 것을 알 수 있다.
4. Conclusion
이번 실험은 용액 내에 포함된 단백질의 양과 농도를 구하는 실험이었다. 다양한 단백질 정량법들 중 우리는 Lowry 법을 사용했고, 이는 단백질의 양을 정확히 정량하는 것이 중요했다. 실험의 과정에서 먼저 BSA 용액과 Lowry Reagent를 섞어주자 각 농도의 샘플 용액은 옅은 보랏빛을 띄었는데, 이 이유는 Lowry Reagent를 단백질 용액과 반응시키면 구리와 단백질의 펩타이드 결합이 반응해 옅은 보라색을 띄게 되고, Folin Reagent를 넣어주자 구리 이온이 아미노산의 산화를 유도해서 시간이 흐름에 따라 단백질 시료의 농도가 높을수록 더 진한 청색으로 변화했다. 그리고 50 농도의 샘플 용액을 사용해 600, 650, 700,750, 800, 850, 900nm 의 파장에서 각각의 흡광도를 측정하여 가장 높은 흡광도가 나온 750nm를 최적의 파장대로 설정했다. 이는 보라색이 흡수하는 파장대이기 때문에 흡광도 측정에 가장 정확한 결과를 얻을 수 있었고, 이 파장대에서 각 다양한 농도의 샘플 용액들의 흡광도를 측정해 평균값으로 BSA standard curve를 그렸다. (Fig 6.) 이 그래프의 값은 0.997로 나왔는데, 1에 가까울수록 실험의 결과가 정확하다고 판단할 수 있으므로 이번 실험은 정확도가 아주 높게 나온 훌륭한 실험이었다. 또한 BSA standard curve에서의 직선의 방정식을 이용해 미지 농도의 샘플 용액의 농도까지 계산해낼 수 있었다.
비교적 정확도가 높은 만족스러운 실험이었지만 더 높은 정확도를 얻지 못했던 몇 가지 오차의 원인을 분석해보자면 먼저 피펫의 사용으로 인한 오차의 발생을 꼽을 수 있다. BSA 용액에 Lowry Reagent와 Folin Reagent를 넣어준 뒤에는 각각 Pipetting을 하는 과정이 있었는데, 이 과정에서 피펫 내에서의 기포의 발생과 피펫에서 용액을 내보낼 때의 기포의 발생으로 인해 측정량의 변화가 생겼을 수 있을 것 같다. 조교님께서도 Pipetting 과정에서 아예 기포가 발생하지 않게 하는 것은 어렵다고 하셨지만, 최대한 기포의 발생으로 인한 오차가 생기지 않도록 해야 할 것 같다.
또 다른 오차의 원인으로는 흡광도를 측정하기 위해 UV/Vis spectrophotometer를 사용할 때는 용액들을 큐벳에 담아서 사용하는데, 큐벳을 잡을 때 큐벳의 투명한 부분을 잡아야 하는데, 헷갈려서 이곳 저곳을 잡았기 때문에 이로 인해 지문이 묻어 흡광도 측정에 오차가 생겼을 수 있다. 그래서 투명한 부분이 아닌 빗살무늬의 불투명한 부분을 잡아야 하는데 정확한 사용법을 미리 알지 못해서 생긴 실수이므로 다음부터는 큐벳의 불투명한 부분을 집어 더욱더 정확도가 높은 흡광도 측정 실험을 할 것이다.
5. Reference
[1] 2018년도 2학년 2학기 실험노트
[2] 단백질 정량 실험 예비레포트
[3] 분석화학, 제 8판, Daniel C. Harris, 자유아카데미, page 439

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