전기 영동

소개글

전기 영동에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Introduction
(1) 전기영동(electrophoresis)
(2) 원리
(3) 응용

2. Materials & Mathods
(1) 재료
(2) 시약
(3) 실험 방법

4. Result
(1)침전물의 색상
(2) 전기 영동 실험 결과(그림)
(3)결과 그림의 형태 분석

5.Discussion
(1)실험에 대한 고찰
(2)전기 영동 실험 결과 해석
(3)SDS의 특성 및 역할
(4)전하에 미치는 pH의 영향
(5)단백질의 특성과 전기 영동법의 관계
(6) kDa(kilo Dalton): 1000 g/mol에 해당하는 분자량의 단위이다. 아미노산 한 개의 분자량이 평균 110 g/mol 이라 하면 각 size marker는 아미노산 몇개짜리 폴리펩티드에 해당하는지 계산해 보자.
(7)단백질에 관하여

5.Reference

본문내용

enomics)에서 DNA의 증폭기술 (PCR)이 일종의 게놈구조결정의 전환점이 된 것처럼 단백질도 무엇인가 그런 핵심적(Core)이고 기반적인(platform) 기술이 필요했다.
이것이 바로 위에서 언급한 2-D gel을 이용한 분석기술이고, MALDI-Mass 분석기술이라고 본다.
이중에서도 2-D gel 전기영동은 매우 정교한 단백질 분리기술인데도 불구하고 분석용외에는 분리정제용 목적으로 사용되지 않은 탓에 현재의 프로테오믹스 구성분처럼 큰 기능을 못하였다.
단백질의 화학적인 분자량 측정 방법
ㄱ. MALDI : 2D-gel 상에 분리된 단백질을 trypsin 으로 가수분해하여 얻은 단일전하를 띈 이온화된 펩타이드를 분석하는 기법
효과적인 MALDI 분석을 위하여는 질소레이저(337 nm)를 사용, 분석대상물질의 비행시간을 측정하여 각각의 mass (m/z)를 분석하는 TOF 형 (MALDI-TOF) 이 활용된다.
ㄴ. ESI(분무이온화법) : 정제된 시료를 이온화 시켜 분석하는 방법으로 LC 등 컬럼크로마토그라피와 연결시켜 사용 가능
② Preparative 2D
프로테오믹스 분야에서 가장 중요한 발전은 2-D gel을 "preparative" 용도로 사용하기 시작한 것으로 여기에다 고정화된 pH gradient 기술이 접목이 되면서 매우 빠르게 프로테오믹스 기술이 진전되기 시작하였다.
이와 더불어 2-D gel용 sample 추출방법과 densitometer에 의한 image 분석이 개발되면서, 이 2-D gel은 매우 빠른 속도로 발전하기 시작하였다.
프로테옴기술의 핵심중 하나는 단백질 생화학 기술인 2-D 전기영동 (단백질의 pH 등전점 (pI)으로 나타내는 net charge에 따라 제1차 분석을 한 후, 분자량에 따라 분리) 기술이다.
이 기술을 사용하면 분석 대상 단백질 sample을 세포의 특정 생리 조건에 따라 제조하여 특정 spot에 대한 분리 양상을 지도로 구성할 수 있다.
연구대상의 특정 spot의 단백질을 적당한 크기로 자른다
이들을 trypsin을 사용하여 단편조각으로 만든다
MALDI-TOF등의 단백질 질량 분석기로 분석하여 아미노산 서열 결정
단백질이나 genome data base를 bioinformatics tool로 찾아 이 단백질의 정체를 확인
이후의 일은 이 단백질의 신규성과 기능을 알게된 cDNA로 찾아 세포내에서 과다 발현시켜 in vitro assay (효소분석)를 하거나 해당 유전자의 knock-out 동물이나 변이 세포를 사용하여 그 유전자의 기능을 in vivo에서 검정 (target validation) 한다.
문제는, 이렇게 발견된 단백질의 신규성 (novelty) 여부와 이것의 기능이 얼마나 다양한지를 밝히는 일인 것이다.
5.Reference
(1)Molecular cloning1,3 2/ed, sambrook외, CHS,1989
(2)생화학실습, 민경락 외
(3)http://www.dm4you.com/study/studyproteomics.html

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전기,   영동,   전기 영동,   생물 실험,   DNA,   영동전기