2013 세포배양학(기말 자료).pptx

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목차

시험범위
세포증식
세포성장곡선
Hayflick’s Phenomenon (limit)
Hayflick’s limit and Aging
MTS assay
Tetrazolium salt
Protocol(P84)
3. Results
Transfection
Transfection법
Reporter gene
Transfection efficiency
(Method)
(Result)
RNA interference (RNAi) technology
A. structure of siRNA, B. mechanism of RNA-interference
RT-PCR(P169),
Southern blotting
Northern blotting
Western blotting
Tag결합단백질(P177)
Reocombinant protein 정제: His-Tag
Protein Purification
EGFP and GFP
Blotting ?
Principles of Western blotting
RNA interference (RNAi) technology
His-Tag
SDS-Page
Southern blotting
Northern blotting
Western blotting
A. structure of siRNA, B. mechanism of RNA-interference

본문내용

시험범위

• P82: 세포증식곡선-증식곡선, MTT(MTS) assay
• P140: 유전자도입 -Transfection
• P125: GFP 가시화 기술을 이용하나 organelle의
　동태관찰 (Reporter gene)
• 유전자발현억제-Antisense법(P182), RNAi(P186)
• 유전자발현분석
　Northern분석(P165), RT-PCR(P169), Western blotting(P172),Tag결합단백질(P177)
• DNA 전기영동, 단백질 전기영동
• 재조합단백질정제: polyhistidine-Ni2+ NTA 정제




세포증식

• 배양세포의 분열로 세포의 수가 늘어나는 것
• 배양세포의 상태를 아는 것은 배양의 기본
• 세포배양실험에서 세포의 기능 상태를 나타내는 지표
① 세포수 계측에 의한 증식곡선작성(growth curve)
② 증식의 전제가 되는 현상 해석
③ 증식결과로서의 세포량 증대를 해석(MTS assay)




세포성장곡선

　≪ 그 래 프 ≫




Hayflick’s Phenomenon (limit)

헤이플릭 한계(배양기 속에서 세포가 생존하는 한계)

• 정상사람세포는 Hayflick’s limit라 하여 50-70번 정도 분열 후 더 이상 분열하지 못 하고 사멸
• HeLa cells
• Telomere

　≪ 그 래 프 ≫




Hayflick’s limit and Aging

• There appears to be a correlation between the maximal number of passages and aging.
• The number of passages decreases when cells are harvested from older individuals.

　≪ 그 래 프 ≫




　≪ 그 래 프 ≫　≪ 그 래 프 ≫




MTS assay

　≪ 그 림 ≫　≪ 그 림 ≫

Cell proliferation/cytotoxicity assays are widely used in the field of drug screening and the investigating influences of cytokines, chemicals and growth factors on cell functions.

The reduction of tetrazolium salts is one of the reliable and common method to determine cell viability and cytotoxicity. MTT(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide) is a well known tetrazolium salt for determining mitochondrial dehydrogenase activity in living cells.

키워드

세포배양학,   세포증식곡선,   MTT(MTS) assay,   유전자도입,   Transfection,   Reporter gene,   유전자발현억제,   Antisense법,   RNAi,   유전자발현분석