미생물학 실험의 기본조작

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목차

Ⅱ. 미생물학 실험의 기본조작
백금이, 백금선 잡는 법
백금이, 백금선의 화염멸균
백금이, 백금선의 냉각
집락에서의 세균 채취

Ⅲ. 염색
목 적
원 리
1. 단염색(Simple stain)
2. 그람염색(Gram staining)
3. 항산성염색(Acid - fast staining)
4. 아포염색(Spore staining)
5. 협막 염색(Capsule staining)

Ⅳ. 세균 배양
1. 선상도말배양법(streak plate culture)
2. 사면배지 도말배양법(nutrient agar slant culture)
3. 액체배지 배양법(nutrient broth culture)

본문내용

협막내로 들어갈 수 없는 먹물(india ink)과 단염색에서 사용하는 염기성 염료를 사용한다.
이 염색에서는 배경은 먹물로 염색되고, 세균은 염기성 염료에 의해 염색되나 협막은 염색이 되지 않아 세균과 배경 사이에 투명대(clear zone)로 나타나게 된다.
재 료
(1) 영양액체배지에 18시간 배양한 Klebsiella pneumoniae
(2) 먹물(india ink)
(3) Safranin
(4) 슬라이드 글래스
방 법
(1) 슬라이드 글래스 한 끝에 균액을 백금이로 한방울 떨어뜨려 놓는다.
(2) 균액과 동일량의 먹물을 균액 옆에 떨어뜨린다.
(3) 다른 슬라이드 글래스를 45.각도로 쥐고 한 쪽 끝으로 잘 혼합하여 밀어서 도말한다.
(4) 도말 표본을 공기 중에서 건조시킨다.
(5) 말린 도말 표본을 불꽃 위에서 가볍게 고정시킨다.
(6) Safranin액으로 1분간 염색한 후 물로 씻어낸다.
(7) 표본을 다시 건조시며 경검한다.
* 검은 배경에 균체는 적색 또는 분홍색으로, 협막은 투명대로 나타난다.
Ⅳ. 세균 배양
원 리
세균배양이라 함은 실험실에서 만든 배지에 세균을 증식시키는 것을 말한다. 두 종류이상의 세균을 동시에 배양하는 경우를 혼합배양이라고 하며 한 종류의 세균만을 배양하는 경우를 순수배양이라고 한다.
세균은 인체, 동물 및 자연계에 널리 산재하고 있으며 보통 검사재료에도 많은 종류의 세균이 혼재하고 있으므로 목적하는 세균의 특성을 파악하기 위해서는 목적하는 세균을 다른 균들로부터 분리하기 위한 순수 분리배양을 해야한다.
일반적으로 세균의 순수분리배양에는 평판고형배지가 많이 사용되며 평판고형배지에서 세균을 배양하면 한 개의 균이 분열 증식하여 눈에 보이는 독립된 집단을 형성하게 되는데 이것을 집락(colony)이라고 한다.
세균의 집락은 세균의 종류 및 배지의 종류에 다라 그 형태와 색상등이 다르므로 각 집락의 특징적인 형태를 잘 이해하는 것이 세균을 순수분리배양하는데 매우 중요하다.
1. 선상도말배양법(streak plate culture)
재 료
(1) 영양액체배지에 18시간 배양한
(가) Escherichia coli
(나) Staphylicoccus aureus
(2) 영양한천평판배지
(3) 백금이(loop)
방 법
(1) 백금이를 불꽃으로 멸균한 후 식힌다.
(2) 균이 들어있는 시험관 마개를 뽑고 불꽃으로 시험관 입구 주위를 살짝 멸균한 후 균액을 한 백금이 떠낸다.
(3) 그림 3-2과 같이 평판배지 표면에 1차적으로 선상도말 한다.
(4) 맥금이를 불꽃으로 멸균한 후 식힌다.
(5) 동일한 방법으로 그림과 같이 2, 3, 4차 선상도말한다.
(6) 사용이 끝난 백금이를 불꽃으로 멸균한다.
(7) 선상도말한 평판배지를 37 에서 18시간 배양한다.
2. 사면배지 도말배양법(nutrient agar slant culture)
재 료
(1) 영양액체배지에 18시간 배양한
(가) Staphylicoccus aureus
(나) Proteus vulgaris
(다) Pseudomonas aeruginosa
(2) 영양한천사면배지
(3) 백금이
방 법
(1) 백금이를 불꽃으로 멸균한 후 식힌다.
(2) 균이 들어있는 시험관 마개를 뽑고 시험관 입구주위를 살짝 불꽃으로 멸균한 후 균액을 한 백금이 떠낸다.
(3) 그림과 같이 사면배지 표면에 선상도말한다.
(4) 마개를 막고 사용한 백금이를 불꽃으로 멸균한다.
(5) 동일한 방법으로 다른 균을 새로운 사면배지에 선상도말한다.
(6) 사용이 끝난 백금이를 불꽃으로 멸균한다.
(7) 선상도말한 사면배지를 37 에서 18시간 배양한다.
3. 액체배지 배양법(nutrient broth culture)
재 료
(1) 영양액체배지에 18시간 배양한
(가) Staphylicoccus aureus
(나) Proteus vulgaris
(다) Pseudomonas aeruginosa
(2) 영양액체배지
(3) 백금이
방 법
(1) 백금이를 불꽃으로 멸균한 후 식힌다.
(2) 균이 들어있는 시험관 마개를 뽑고 시험관 입구주위를 살짝 불꽃으로 멸균한 후 균액을 한 백금이 떠낸다.
(3) 그림 3-5과 같이 새로운 액체배지 시험관에 넣는다.
(4) 마개를 막고 사용한 백금이를 불꽃으로 멸균한다.
(5) 동일한 방법으로 다른 균을 새로운 액체배지 시험관에 한 백금이 넣는다.
(6) 사용이 끝난 백금이를 불꽃으로 멸균한다.
(7) 균을 옮겨 심은 액체배지 시험관을 37 에서 24 48시간 배양한다.

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