Cellular gene expression and its significance to the cell proliferation

소개글

Cellular gene expression and its significance to the cell proliferation에 대한 보고서 자료입니다.

목차

Ⅰ. 서 론
(1) 실험목적
(2) 실험과 관련된 Method의 이론적 접근
1) Tumor Cell
2) Cell Counting
3) Transfection
4) MTT Assay

Ⅱ. 본 론
(1) 실험방법
1) Cell thwaing and maintenance
2) Subculture & Transfection
3) Lac-Z staining
4) Significances of a gene in cells
5) MTT Assay
(2) 결과 및 분석
1) Clonal cell culture & subculture
2) Transfection
3) MTT Assay

Ⅲ. 결 론 (고 찰)

본문내용

cell에 X-gal이 첨가된다면β-galactosidase에 의해 X-gal이 분해가 되어 cell이 파랑색을 나타내게 될 것이다. 우리는 이 원리를 이용하여β-galactosidase를 암호화하고 있는 DNA를 cell에 transfection시킨 후 X-gal이 첨가된 solution을 처리하여 파랗게 된 cell을 총 cell 수로 나누어 transfection 효율을 구했다.
3) MTT Assay
: MTT assay는 탈수소 효소작용에 의하여 노란색의 수용성 기질인 MTT tetrazolium을 청자색을 띄는 비수용성의 MTT formazan (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyl-tetrazolium bromide)으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 이용하는 검사법이다. 여기에 DMSO를 첨가하게 되면 DMSO는 환원된 MTT formazan을 녹이는 작용을 한다. MTT Assay는 바로 DMSO에 의해 녹은 MTT formazan을 분광학적인 방법으로 측정하는 것으로 MTT formazan의 흡광도는 540nm의 파장에서 최대가 되며, 이 파장에서 측정된 흡광도는 살아있고 대사가 왕성한 세포의 농도를 반영한다. 즉, OD값은 살아있는 세포의 수와 비례한다.
그래프에서 볼 수 있듯이 배양 후 24시간 후 MTT Assay를 시행한 Plate 2의 cell인 day0는 OD값이 0.054, 공Vector인 pcDNA3.1을 넣은 pc는 OD값이 0.101, syndecan-1 cDNA를 넣은 sdc의 OD값은 0.172로 day0가 가장 낮고 sdc가 가장 높은 것을 알 수 있다. 이 데이터는 syndecan-1 cDNA가 tumor cell에 미치는 영향에 대해 알려주고 있는데 분주 하루만에 MTT Assay를 한 Plate 1은 4일 후에 MTT Assay를 할 Plate 2와의 비교를 위한 것이다. pcDNA3.1은 Plasmid expression vector로써 여러 유전자를 이 vector에 삽입하여 다른 개체에 transfection 시킴으로서 유전자를 그 개체에서 발현시킬 수 있도록 하는 vector이다. 하지만 이번 실험에서는 아무런 유전자도 삽입하지 않은 공vector로서 syndecan-1 cDNA와 비교하기 위해 사용하였다. 데이터에 따르면 day0와 Plate 2의 cell과의 비교를 통해 tumor cell은 계속해서 성장을 한다는 사실과 syndecan-1 cDNA은 tumor cell의 성장을 활성화 시킨다는 것을 pcDNA3.1와의 비교를 통해 알 수 있다.
Ⅲ. 결 론 (고 찰)
: 이번 실험에서 생리학 실험의 기초 skill이라 할 수 있는 tumor cell의 배양과 subculture, normal cell과의 차이점, cell counting 등 기초 지식과 transfection의 원리, transformation과의 차이점, transfection의 효율 계산, MTT Assay를 통한 살아있는 cell의 숫자 측정법 등 전문 지식을 많이 알게 되었다. 의외인 것은 생각보다 간단한 원리로 눈에 보이지 않는 cell을 조작할 수 있다는 사실이다. 이론적으로 가능해보이지만 우리가 예상하지 못하는 수많은 변수가 있기에 실제로는 쉽게 되지 않을 것 같은데 단지 몇 가지 시약만으로 내 손으로도 transfection을 할 수 있다는 사실이 신기했다.
Cell culture에서는 배지의 오염을 가장 주의해야 하는데 도구를 다루는 skill이 부족해서인지 배지의 오염이 있었다는 것이 아쉬운 점으로 남는다.
지금까지 해본 실험 중에 가장 광범위한 지식을 총동원해야 하고 이해하기도 쉽지 않고 많은 시간을 투자해야 했지만 그만큼 다방면에 많은 지식을 쌓을 수 있었고 투자한 시간이 아깝지도 않았다.
※ 참고 문헌
1. ‘Essential Genetics perspective’, Daniel L.Har & Elizabeth W.Jon, 2002
2. ‘유전자 클로닝 입문’, 강종백 외, 월드 사이언스, 2004
3. ‘Understanding DNA and Gene Cloning: A Guide for the Curious' ,
Karl Drlica, John Wiley & Sons, 2003
4. 'Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique',
R. Ian Freshney, John Wiley & Sons, 2000

키워드

cell culture,   subculture,   transfection,   MTT Assay,   tumor Cell,   세포 배양,   cell line,   동물생리