세포사멸(apoptosis)과 세포괴사(necrosis)

목차

A. T cell Apoptosis
1. T Cell
2. Apoptosis
3. Apoptosis의 기작
4. Apoptosis의 역할
5. Apoptosis 과정의 모식도

B. Apoptosis vs. Necrosis
1. 형태학적 차이
2. 생화학적 차이
3. 생리학적 중요성

C. Apoptosis Detection
1. Cytotoxicity Detection(LDH)
2. Annexin-V-FLUOS staining
3. Cell Death Detection ELISA
4. Apoptotic DNA 전기영동
5. DNA Extraction for Apoptosis of Intergen
6. Caspase 3 Activity Assay
7. In Situ Cell Death Detection

본문내용

정량 및 검출(Annexin-V란 Apoptosis 초기 단계에서 세포막 지질 이중층 안쪽 layer의 phosphatidyl serin(PS)가 바깥쪽으로 trans- location됨. Annexin-V는 Ca+의존성으로 PS에 특이적으로 결합하는 물질)
- 특징
Flow Cytometer를 이용하거나 immunochemistry를 이용
DNA를 stain하는 데에 쓰이는 propidium iodide solution(red)을 이용, 괴사에서 온 PS를 검출
Annexin-V에 Fluorescein이 labeling되어 있음
3. Cell Death Detection ELISA
- 원리 : Apoptosis 일어난 세포를 lysis시킨 후 histone과 결합된 DNA fragment(mono and oligonucleotide)를 in vitro상에서 정량하는 방법.
- 특징
별도의 labeling 과정이 필요 없음.
Necrosis와 apoptosis를 구별할 수 있음.
Necrosis가 일어난 세포는 lysis 시키지 않은 culture supernatant에서 검출할 수 있다.
4. Apoptotic DNA 전기영동
- 원리 : 전기영동을 통해서 Apoptotic DNA fragment를 display
- 특징
DNA binding fiber 이용하는 편리한 방식
Apoptosis를 일으키는 세포는 규칙적인 패턴으로 DNA를 조각내기 때문에, 전기영동 시 ladder 모양을 보이는 것을 이용
Apoptosis를 induction한 후 20분 이하의 시간에 준비 가능
Lane Ldentification
M = Size marker
- = Control cells without camptothecin
+ = Cells treated with camptothecin
C = Positive control from the kit
5. DNA Extraction for Apoptosis of Intergen
- 원리 : Apoptotic DNA ladder analysis를 위한 genomic DNA extraction을 한다.
6. Caspase 3 Activity Assay
- 원리 : Apoptosis에 결정적 역할을 하는 효소인 Caspase 3의 정량 및 활성을 결정
- 특징
Fluorometric Immunosorbent Enzyme Assay(FIENA)
특히 active form Caspase 3만을 detect하며, 다른 종류의 Caspase의 activity를 모두 배제함
7. In Situ Cell Death Detection
- 원리 : TUNEL assay를 이용하여 single Cell level에서 flowcytometry 또는 형광현미경으로 apoptotic cell을 정량 및 검출
- 특징
Apoptosis 초기 단계에 일어나는 DNA cleavage 현상을 이용.
Apoptosis에 의해 끊어진 DNA의 3-OH 말단에 TdT를 이용하여 fluorescein-dUTP나 TMR-red-dUTP을 표지 (TUNEL method : TdT- mediated dUTP-X nick end labeling)
광학 현미경으로의 detection을 위해서 최종 검출단계를 Alkaline phosphatase나, Peroxidase로 전환시키기도 함
Detection of apoptotic cells(green) by fluorescence microscopy in a tissue section from rat.
4. Reference
- bric.postech.ac.kr/webzine/content/review/immun/2001/Mar/ctm03.html
- www.vegemil.co.kr/webzine/webzine01_08_09/02.htm
- med.inje.ac.kr/lrc/Simpo/Malaria/Malaria_semin
- www.bmskorea.co.kr/cell01-1.htmar_09.htm
- biochem.roche.com/fst/products.htm?/apoptosis/
- user.chollian.net/~serioso/molecular/apoptosis.html#4
- www.kimwootae.com.ne.kr/generalbiology/bcell-tcell.htm
- home.inje.ac.kr/~lecture/immunology/immch7tcell/immch7tcell.htm

키워드

세포사멸,   apoptosis,   세포죽음,   세포괴사,   necrosis