[미생물실험]3,4.미생물의 염색(그람,아포,음화,항산성)

목차

Ⅴ Result
Ⅵ Description
Ⅶ Discussion
Ⅷ Reference

본문내용

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Ⅵ Description
구강은 온도, 습도, ph 및 산환 전위 등 미생물의 발육에 필요한 각 종의 환경인자들을 가지고 있다. 또 사람은 입을 통해 영양분을 공급하고 타액의 흐르는 등 많은 미생물이 서식하는데 좋은 조건을 가지고 있다. 이런 구강세균은 세포벽 층이 두껍고 지방체이므로 염색약이 잘 침입할 수 없기 때문에 염기성 염료에 염색이 잘 되지 않는다. 따라서 실험에 쓰인 nigrosin은 음이온을 나타내기 때문에 세균을 염색시키지 못하고 세포 주변에 염료가 모이게 된다. 따라서 세균이 염색되는 것이 아니고 배경이 염색되어 세균과 대조를 이룸으로써 세포의 모양을 확인한다. 이러한 방법으로 치아표면의 세포를 관찰했을 때 둥그런 모양의 균들(구균)들이 보였는데 이는 배경은 보라색(violet)으로 염색되었고 균들은 무색으로 염색되지 않은 모습을 볼 수 있다. 같은 방법으로 혀의 표면을 관찰하였을 때, 치아표면과 마찬가지로 둥그런 모양의 균들(구균)들을 볼 수 있고 배경은 보라색(violet)으로 균들은 무색으로 염색되지 않았다. 치아 표면이나 혀의 표면에서 관찰한 균들은 크기나 모양이 거의 비슷했는데 이는 구강의 어느 곳에도 비슷한 균들이 서식함을 알 수 있다.
실험날짜
담당 교수님
학번
이름
Ⅴ Result
학번
이름
1. 항산성 염색 후 현미경에서 관찰한 균들의 형태를 스케치하고 실험결과를 설명하시오.
실험군 (Norcardia restricta)
(×1000)
균들은 적색(red)로 염색되어 넓게 퍼져있다.
:Carbol fuchsin에 의한 염색이 3% HCL alcohol로 탈색되지 않아 methylene blue용액으로 염색되지 않았다. 따라서 1차적으로 가온염색한 Carbol fuchsin색인 적색(red)을 띄고 있다.
대조군 (Escherichia coli)
(×1000)
막대모양의 간균들은 투명하거나 푸른색으로 염색되어 넓게 퍼져있다.
:1차적인 Carbol fuchsin에 의한 가온염색은 3% HCL alcohol로 탈색되어 무색이 되고, 그곳에 2차적으로 methylene blue용액을 염색하여 푸른색이 띄고 있다.
Ⅵ Description
실험군 Norcardia restricta을 Carbol fuchsin에 의해 가온염색한다. 가온염색 할 때에는 염색약이 증발하여 마르지 않도록 적절히 보충해 주어야 하고 염색약이 끓지 않도록 가열 온도를 적당히 조절함으로써 균의 손상을 막는다. 가온염색이 되면 3% HCL alcohol로 충분히 탈색한 후, methylene blue 용액으로 대조염색 하고 현미경을 통해 관찰하는데 이때 균은 적색(red)을 띄고 있다. 이는 탈색 시에 Carbol fuchsin에 의한 염색이 탈색되지 않고 Carbol fuchsin의 색을 그대로 가지고 있는 것인데 Norcardia restricta가 항산성의 성질을 갖고 있음을 알 수 있다. 이에 비해 대조군인 Escherichia coli는 푸른색의 methylene blue용액의 색을 띄고 있거나 무색을 띄고 있었다. 이는 산에 내성이 없어 3% HCL alcohol로 탈색이 된 세포에 methylene blue 용액으로 재염색이 된 것이며 무색의 세포는 탈색 시에 많은 탈색이 되어 methylene blue용액이 잘 염색되지 못한 오차이다.
앞에서 한 아포염색에서 내생포자(Endospore)라던가 Norcardia속의 균은 Carbol fuchsin으로 Acid alcohol로 탈색 시 탈색되지 않는 항산성(acid-fastness)의 성질을 갖고 있다. 이 같은 PH4이상의 균은 세포벽이 두꺼운 층으로 되어있고 다량의 지질이 산에 내성을 갖게 되는데 따라서 산에 내성을 가진 세균은 3% HCL alcohol에 탈색되지 않아 기존에 염색약이 빠지지 않는 것이다.
Ⅶ Discussion
항산성 염색
대부분의 미생물은 단순염색이나 그람염색 등에 의해 잘 염색이 되지만 몇몇 균주 특히 Mycobacterium sp.는 염색이 되지 않고 항산성 염색법에 의해서만 염색이 되며, M. tuberculosis와 M. leprae는 병원성 미생물이므로 이들의 진단과 분류에 이 방법이 응용되고 있다. 즉 Mycobacterium sp.는 다른 미생물과 달리 세포벽이 두터운 왁스성 물질을 다량 함유하고 있어 염색이 잘 되지 않으며 가온 염색을 하여야 된다. 그리고 한 번 염색이 되면 Acid-alcohol로도 잘 탈색이 되지 않아 이러한 성질을 항산성(Acid fast)이라 하고 반면 대부분의 미생물은 Acid-alcohol에 의해 쉽게 탈색이 되는 Non-acid-fast 성질을 가지고 있다.
항산성 염색은 먼저 1차 염색시약으로 Carbol fuchsin을 사용한다. 일반 세균과는 달리 Mycobacterium은 methylene blue나 Crystal violet 같은 염색시약에 의해서 염색이 되지 않고, Phenol성 시약인 Carbol fuchsin은 Mycobacterium 세포벽의 주요성분인 지방성물질을 용해하는 성질이 있어 세포벽에 염색약이 흡착된다. 이러한 흡착을 도와주기 위해 열을 가하면 Carbol fuchsin은 지질 세포벽을 통과하여 세포질을 흡착하게 된다. 1차 염색후 탈색제로는 Acid-alcohol을 사용하여 탈색을 할 때는 가열된 슬라이드를 냉각하는 것이 좋다. 왜냐하면 냉각에 의해 왁스성의 세포물질이 경화되어 Acid-alcohol에 쉽게 탈색되지 않기 때문이다. 따라서 Mycobacterium 은 1차 염색약을 흡착된 상태가 유지되어 적색을 유지하게 된다. 반면, Non-acid-fast 균체는 왁스성 물질이 부족하여 쉽게 탈색되어 무색의 상태가 된다. 여기에 대응염색시약으로 methylene blue를 사용하여 2차 염색한다. 탈색된 Non-acid-fast 균체는 이 시약에 의해 염색이 되지만 탈색되지 않았던 Acid-fast 균체는 그대로 1차 염색약에 의해 붉은색을 띄게 된다.
Ⅷ Reference
미생물학실험서 / (주)을유문화사 / 한국미생물학회 / p43~44
실험날짜
담당 교수님
학번
이름

키워드

염색,   미생물의 염색,   그람,   아포,   음화,   항산성