Lowry, Kjeldahl 법을 이용한 단백질 정량

목차

< Introduction >

< Principle >

< Materials >

< Method >

< Result >

< Discussion >

< Reference >

본문내용

소의 각 원소 외에 반드시 일정량의 비율로 질소를 함유하고 있다. 특히 질소는 지방이나 탄수화물 등 식품의 다른 중요 성분에는 포함되어 있지 않으므로, 식품중의 단백질 정량은 전질소량을 정량하고 그 값에 일정의 계수를 곱하여 조단백질의 양을 구한다.
< Principle >
가장 널리 사용되어지는 정량법의 한 가지로서 감도도 좋고, column chromatography에 있어서 단백질의 정량에 적합하다. 또한 이하에 나타낸 물질이 혼재하여도 정량치에 영향을 주지 않는다. 본 법의 원리는 알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 구리 이온을 생성하는 뷰렛 반응 원리를 이용한 실험이다. 구리 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 인몰리브덴산(인덩스덴산)이 단백질 중의 트립토판과 티록신에 의해 환원되어 인몰리브덴블루(인덩스덴블루)의 청색을 나타내는 것에 기초를 두고 있다
< Materials >
증류수, , 2% Sodium Carbonate, Sodium citrate, Sodium Hydroxide, Folin-Ciocalteu phenol reagent, test tube, 메스실린더, 볼륨매스, vortex mixer, pipet, 흡광도 측정기계, curvett
< Method >
-Solutions ① A (100ml) 0.5g + 1g Sodium citrate, 100ml 증류수
② B (1L) 20g Sodium Carbonate + 4g Sodium Hydroxide, 1L 증류수
③ C (51ml) 1ml Solution A, 50ml Solution B
④ D (20ml) 10ml Folin-Ciocalteu phenol reagent, 10ml 증류수
- ① Sample solution을 0.5ml 증류수와 준비한다.
② Solution C 2.5ml를 넣는다.
③ Vortexing 하고 상온에서 5~10분간 둔다.
④ Solution D를 0.25ml 넣고 vortexing 한다.
⑤ 20~30분 뒤에 750 nm에서 O.D
- y=ax+b 꼴의 그래프가 그려지는데 y=abs(흡광도), x=농도(mg/ml)이다.
단백질함량(mg/ml)=(Sample Abs-b)x희석배수
< Reference >
http://blog.naver.com/istyle333?Redirect=Log&logNo=60096033897
생물공학실험서/한국생물공학회/자유아카데미/2000/p.28

키워드

단백질 정량 ,   질소정량법,   Lowry 법,   Kjeldahl 법