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발색하는 것을 관찰하여 목표 단백질의 존재 여부를 알 수 있다. 정확한 결과를 위해 항체의 비특이적 결합을 방지해주는 TBST로 세척해 준 다음 peroxidase의 기질인 luminol이 peroxidase에 의해 산화되면서 푸른색 빛을 내는 것을 X-Ray film, 또는 CCD에
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전기영동과 면역발색을 위해 준비해둔다. 최종적으로 단백질을 정제하기 위해 이 모든 과정이 필요하다.
실험 시간에 계산기를 통해 계산해낸 추세선의 방정식과 Excel Program을 이용하여 구한 추세선의 방정식이 차이가 났다. 당연히 신뢰도에
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효소가 결합되거나 방사성 동위원소로 표지된 항체를 이용
- 세포 용해물의 단백질 혼합액 대신 면역 침강 단백질을 이용함으로써 western blot의 감도와 특이성 증가. 이와 같은 기법은 특히 단백질-단백질 상호 작용을 확인하는데 유효함
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발색시킴으로 미량의 검체액(50㎕)으로 15분 이내에 측정이 가능했다.
면역측정용 효소는 면역측정의 항원항체반응을 정량화하는데 필요한 표지로 효소를 사용하여 효소역가를 측정함으로서 항원 또는 항체의 량을 측정하는 방법으로 가장
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전기영동에서의 역할, toxic한 이유)
- 아가로즈 gel 전기영동 실험을 할 때, 형광 표지(핵산 염색)로 많이 사용이 되는 intercalating agent이다. 이것은 보통 줄여서 EtBr이라고 부르는데, 자외선에 노출시켰을 때, 오렌지 색으로 발색하게 되고, DNA와
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ote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의
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전기영동을 이용하여 단백질과 DNA의 크기를 측정하는 네 번째 실험에서 α-synuclein의 크기는 38.619kd, LDH의 크기는 22.039kd였고 DNA중 하나는 초나선구조, 하나는 선형구조를 갖는다.
먼저 단백질은 SDS-PAGE를 이용하여 크기를 구했는데 SDS는 계면
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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