단백질 전기영동과 Western blotting

본문내용

성 생성물을 얻는 것이다.
효소의 항체 결합 방법
효소는 1차 항체에 직접 결합하거나 또는 간접적으로 2차 항체에 연결될 수 있다. 직접적인 방법은 항체를 형광 색소 혹은 peroxidase나 alkaline phosphatase 같은 효소와 결합시켜서 직접 조직에 있는 항원에 작용시켜서 관찰을 하는 것이고, 간접적인 방법은 항원에 작용시키는 항체(일차항체)는 미표식으로 반응을 시작하고, 그 다음 단계에서 그 항체에 대한 항체 (이차항체)에 형광 색소나 효소 표식을 하여 간접적으로 항원을 검출하는 것이다.
예를 들어 1차 항체가 형광 표지 되어 있으면 효소에 결합한 형광 물질에 대한 항체를 이용하여 검출할 수 있다. 보다 흔한 방법으로는 2차 항체가 효소로 표지되고 1차 항체에 대한 특이성을 갖고 있는 것이다. 이 경우, 항체가 고정된 항원에 결합한 위치에서 다중 효소 분자들이 localization 으로부터 신호 증대된다.
색원체 기질을 발광성 물질로 대체하면 감도가 더 증가될 수 있다. 발광성은 기질에서 전자들이 흥분하여 더 높은 에너지 상태로 되었다가 낮은 상태로 안정화될 때 나타난다. 예를 들어 horseradish peroxidase가 차례로 luminol(발광물) 같은 기질을 산화 시키고, 산화된 luminol은 빛 에너지를 방출하면서 바닥 상태로 떨어진다. 단백질 immunoblotting에서 발생된 빛은 고정된 항원에 도달하고 이것이 사진으로 검출된다. 이 방법의 western blotting은 standard colorimetric assay방법보다 10배 이상의 감도를 보인다.

키워드

전기영동,   Western blotting,   웨스턴,   SDS-PAGE