DNA 분리에 대하여

본문내용

가하여 섞고 55 C에서 흔들면서 조직이 완전히 용해될 때까지 둔다. 대개 1~3시간 소요되며 밤새 두는 것도 좋다. 이후, RNaseA(20 mg/ml) 20 ml를 첨가하여 상온에 2분 두었다가 AL 용액을 200 ml 넣고 잘 섞는다.
3. 70 C에서 10분간 둔다.
4. Isopropanol이나 순수한 ethanol을 210 ml 첨가한다.
u 혈액, 혈장, 혈청인 경우는 isopropanol을, 나머지와 조직은 ethanol을 쓴다.
5. Column을 collection tube에 설치하고 위 혼합액을 apply한 다음 뚜껑을 닫고 8,000 rpm에서 1분간 원심분리한다.
u Buffy coat나 임파구는 최고속도를 쓰는 것이 좋다.
6. 빠져나온 용액을 버리고, 다시 설치한 다음 AW용액을 500 ml 가하고 다시 원심분리한다. 이 과정을 한번 더 반복하고 빠져나온 용액을 버린 다음, 그 상태로 다시 2분간 최고속도로 원심분리하여 남은 용액을 모두 제거한다.
u 위 과정을 거듭하여도 column의 가장자리 턱에 걸린 소량의 용액이 빠지지 않는다. 이를 흡입기를 이용하여 제거해야한다.
7. Column을 새 미세원침관(1.5 ml-microfuge tube)에 옮기고 미리 70 C에 넣어두었던 증류수나 TE, pH 8.0, 또는 AE 용액 200 ml 첨가하고 1분간 두었다가 8,000 rpm에서 1분간 원심분리한다.
u 용액을 첨가한 후 5분간 column 자체를 70 C에 두면 더 효율이 증가한다고 한다. 또한 위 추출과정을 한번 더 반복하면 15% 정도의 효율 증가를 기대할 수 있다.

키워드

DNA,   DNA분리,   DNA실험