식물조직배양

목차

1.제목
식물조직배양(당근 조직배양)
2.실험목적
3.실험이론
4.살균소독
5.배지만들기
1) 배지 제조용 장비
2) MS 배지 조성표
3) 배지제조
6.조직배양
1) 실험 재료
2) 실험 방법
7. 고찰
8. 요약

본문내용

um foil로 배양병의 입구를 봉한다.
⑦ aluminium foil에 날짜, 이름 등을 기입한다.
⑧ 배양체는 25℃ 배양실로 옮겨 암흑 상태에서 배양하면서 며칠 간격으로 계속 관 찰한다.
⇒ 몇 2~3주가 지나면 당근조각의 윗부분에 흰색 세포덩어리인 callus를 관찰할 수 있다.
⑨ callus가 어느 정도 자라면 MS배지가 있는 Petridish에 계대배양 해준다.
배양병의 aluminium foil을 화염멸균하고 뚜껑을 열어서 callus가 있는 당근 조각을 꺼 내서 paper가 깔린 샬레에 놓고 callus부분만 조심스럽게 잘라내서 Petridish 가운데에 callus를 치상한다.
⑩ 파라필름으로 밀봉하고 날짜, 이름 등을 기입한다.
(Petridish를 파라필름으로 밀봉하기 전까지는 clean bench 밖으로 Petridish를 빼는 일 이 없어야한다.)
<2006년 10월 27일>
callus를 MS배지가 있는
Petridish에 치상한 모습
⑪ callus가 어느 정도 자라면 고체 배지에서 액체배지로 계대배양 해준다.
우선 callus를 Petridish에서 꺼내서 paper가 깔린 샬레에서 callus의 상한부분을 절단한 다음에 여러 조각으로 callus를 자르고 액체배지가 있는 배양병에 넣는다.(액체배지가 있는 배양병의 aluminium foil을 벗길 때도 화염멸균을 하고 벗겨야하며 화염 멸균한 메스를 다룰 때 메스가 너무 뜨거울 수 있으므로 바로 callus를 절단하지 말고 배지에 대었다가 callus를 절단한다.) 액체배지에 callus 조각들을 넣은 다음 알루미늄호일과 배양병을 소독 하고 밀봉한다.
<2006년 11월 17일> callus를 잘라서 액체배지가 있는 배지에 넣은 모습
⑫ 암흑조건을 유지하기 위해서 박스를 shaker 위에 올려놓고 박스 안에 액체배지 배양병 을 넣고 callus가 자라는 것을 관찰한다.
※ 쉐이킹(교반)을 해주는 이유
굴지성에 혼동을 주어 특정 방향뿐 아니라 골고루 자라게 하고 표면에 보다 많은 배지와의 접촉기회를 줘서 영양흡수를 돕고, 대사산물의 집적방지를 위함이다.
7. 고찰
당근 조직배양 실험은 배지에 옮길 때 주의해서 옮겨 줘야하는데 만약의 부주의로 인해 배지나 배양체가 오염될 수도 있으니 각별히 신경써야한다. 실험에 이용되는 메스, 핀셋 등과 같은 기구는 끝이 붉은 색을 띨 때까지 가열한 후 사용하고, 배지위에는 손이 오가게 해서는 안 된다 것 또한 주의해야할 사항이다. 이번 실험은 callus 형성 및 배양체의 변화를 관찰하는 실험이지만 당근의 상태가 안 좋았고 제일 처음에 형성층이 들어가도록 당근을 자를 때 당근의 크기가 너무 작아서 callus가 크게 성장하지 못했고 또한 늦게 성장했다.(처음 치상할 때 당근을 1cm 두께로 잘라서 4조각으로 나눈 정도의 크기로 고체배지에 치상했으면 callus가 더 잘 자랐을 것이라는 생각이 든다.) 고체배지에서 액체배지로 옮길 때 callus를 좀 더 잘게 잘라야하는데 크게 잘라서 넣었다는 점도 고쳐야 할 점이다.
8. 요약
- 식물은 세포로 구성되어 있으며, 각 세포에는 생명체가 필요로 하는 유전정보를 가지고 있다. 특히 식물은 동물과 달리 체세포에서 전체 개체를 재생할 수 있는 발생학적 능력을 가지고 있으며, 이를 전체형성능 (totipotency)라고 한다. 식물의 작은 조직을 인공배지에 서 무균상태로 배양하여 식물체를 재생하는 기술을 식물조직배양이라고 하는데, 이는 식 물 개체를 대량 증식하는 번식 수단으로 이용할 수 있으며, 아울러 유전자재조합이 된 식 물세포를 재생하여 유전자변형체를 만드는 중요 기술로 활용되고 있다.

키워드

세포배양,   캘러스,   당근,   조직배양,   MS배지