단백질 정량, SDS-PAGE의 원리 및 SDS-polyacrylamide gel의 제조

소개글

단백질 정량, SDS-PAGE의 원리 및 SDS-polyacrylamide gel의 제조에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Date
　
2. Subject
　
3. Object
　
4. Introduction
　① 전기영동법
　② SDS-polyacrylamide gel 전기영동(SDS-PAGE)
　③ Disc gel 전기영동의 원리
　④ 단백질의 염색
　⑤ Purification of hTrx1 (hTrx1 정제)
　
5. Materials & Apparatus
　※ 5x Protein sample buffer의 조성 및 역할
　※ 원심분리기 (centrifuge)
　※ Coomassie brilliant blue(CBB) 염색
　
6. Methods
　※ 주의사항
　
7. Results
　
8. Discussion
　
9. Reference
　

본문내용

1. Date
　14 April 2006
2. Subject
　단백질 정량, SDS-PAGE의 원리 및 SDS-polyacrylamide gel의 제조
3. Object
　전기영동에 관한 원리 및 기본적인 지식을 익히고, 지난 실험에서 만들어 놓은 Buffer 용액들을 정량 하여 Gel-loading sample을 제작한다. 또한 SDS-polyacrylamide gel을 이용해 단백질을 분리 한다. 마지막으로 분리된 단백질을 염색하여 Prestained Protein marker와 비교하여 단백질의 분자량을 추정해본다.
4. Introduction
　① 전기영동법
　전기영동(electrophoresis)이란 하전된 입자가 전기장에서 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 말한다. 이때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 전하량, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다. 따라서 어떤 용액과 지지체에서 하전된 입자의 이동속도는 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다. 그러므로 전기영동법은 아미노산, 단백질, 핵산들과 같은 하전된 물질들을 분리하는 데 매우 효과적인 수단으로 이용된다.일반적으로 단백질을 분리하는 것은 단백질이 가진 2가지 특징, 다시 말하면 전하와 분자량의 차이를 이용하는 것이다. 2차원 전기영동은 통상 1차원적으로 등전점 전기영동(Iso Electric Focusing: IEF)을 하고, 단백질을 등전점으로 분리해서 다시 2차원적으로 SDS-전기영동(SDS-PAGE)으로 등전점이 같은 단백질을 분자량을 기준으로 분리하는 방법이다. 이 방법은 최초 O’Farell1)이 고안하였지만 지금은 1차원에서 높은 재현성을 얻을 수 있는 고정화 pH 구배(immobilized pH gradient: IPG) gel을 사용하므로 고도의 기술적 숙련도를 필요로 하지 않는다.
　② SDS-polyacrylamide gel 전기영동(SDS-PAGE)
겔 내에서 하전된 분자의 이동도는 분자의 크기와 전하에 의해 결정되며 상대적인 분자량이 다르더라도 특정 상황 아래서는 동일한 전기영동적 이동도를 가질 수 있다.

키워드

단백질,   SDS-PAGE,   전기영동,   electrophoresis