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동결보존법
1949년 Polge 등에 의하여 glycerol처리 동결정액을 성공적으로 사용한 이래 동결정액에 의한 인공수정 방법이 세계적으로 광범위하게 이용하고 있다.그로 인하여 액상정액의 사용이 동결정액으로 대치되면서 여러 가지 실험-온도변
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동결 보호제 제거 않고, 이식 할 경우 생존율이 낮다.
- 녹인 난자를 저농도의 동결보호제가 담긴 배양액으로 옮겨 항동해제 모두 배출되게 한다. < 정액의 희석과 액상보존 >
1. 정액의 보존과 희석
2. 희석과 정자의 생존성
1) 희석의 목
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보존
-수정란을 실온 또는 4~5℃의 저온에서 보존하게 되면 시간이 경과할수록 생존율이 저하되기 때문에 수시간 이내에 이식하지 않으면 안된다.
5) 수정란의 동결보존과 생존성
-장기간 동결보존이 가능해지면 발정동기화 과정을 거치지 않
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여 25㎖ T 플라스크로 옮겨 배양한다.
(2) 주의점
① 동결과 다르게 해동은 신속하게 해야 한다.
② DMSO를 제거하기 위해 배지를 첨가하여 원심분리를 한다.
③ 액체질소가 튀기거나 묻지 않도록 주의한다.
(3) 이론
- 해동을 할 때에는 천천히 하
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대신에 글리세롤을 첨가하는 일도 있지만 DMSO가 보다 효과적이다. 일반적인 동결배지의 조성은 20%혈청과 10%의 DMSO를 첨가한 기본 합성배지이다. 무혈청배양한 세포를 무혈청으로 동결보존하기 위해 만든 무혈청 배지가 있다.
동결배지를 포
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