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미세원침관으로 옮기고 4℃,15,000 rpm에서 10분간 원심분리한다.
6. 상층액(세포단백질)을 새 미세원침관으로 옮긴다. 이 용액은 SDS-PAGE에 이용할 수 있다.
2) 핵단백질(nuclear extract)의 분리
핵단백질의 분리는 1단계의 핵분리과정과 2단계의 단백
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lac operon유전자로부터 떼어내게 되고 이어서 단백질의 합성이 일어나게 된다. 이때 쓰이는 allolactose를 inducer라 하고 이와 비슷한 구조를 가지고 같은 기능을 보이는 화합물 중 대표적인 것이 바로 IPTG이다. 즉, IPTG는 lac operon에서 β-galactosidase가
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20~40 μl와 IPTG(839 mM) 5~10 μl를 미세원침관에서 섞어 배지위에 떨어뜨리고 밀대로 골고루 펴주면 되는데, 37°C에 적어도 10분 두었다가 박테리아를 도말하도록 한다. X-gal은 50 mg/ml의 농도로 dimethylformamide(DMF)에 녹여 빛이 차단된 용기에 담아 -20°C
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미세원침관(1.5 ml-microfuge tube)에 옮기고 미리 70 C에 넣어두었던 증류수나 TE, pH 8.0, 또는 AE 용액 200 ml 첨가하고 1분간 두었다가 8,000 rpm에서 1분간 원심분리한다.
u 용액을 첨가한 후 5분간 column 자체를 70 C에 두면 더 효율이 증가한다고 한다. 또
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