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가지로 단백질의 펩티드 결합과 알칼리성 구리()와의 반응과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판 들에 의한 환원반응으로 생긴다. 이때 색은 청색으로 나타난다. (이 두 아미노산의 함량은 단백질의
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기울어진 것으로 보아 gradient가 용리되었거나 다른 성분의 피크와 함께 용리되어서 일 것으로 보인다.
따라서 우리는 이번 실험을 통해서 HPLC의 원리를 익히고 비타민 C를 정량하며, 결과를 분석하여 오차의 원인을 추측할 수 있었다.
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혼합되지 않도록 한다.
<단백질 정량>
① Protein sample과 BSA를 얼음위에서 녹인다.
② 샘플과 blank에 들어간 DW 8ul를 먼저 넣는다.,
③ 96well plate에 1mg/ml BSA를 ½로 serial dilution한다.
④ Blank 값을 자을 buffer를 5배 희석하여 넣어준다.
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균질화 시킨다.
⑧ 추출 시료를 바이알의 절반 정도까지 취하여, HPCL 기기에 바이알을 꽂는다.
3) HPLC 분석 조건
표준용액과 시료용액 1ml를 0.2um syringe filter로 여과하여 다음과 같은 조건으로 분석
Condition
Column
Detector
Mobil phase
Flow r
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5ml를 흘려넣어 용출(caffeine)한다.
⑥ 10ml 부피 플라스크의 표시선까지 초순수를 넣어 전체 부피가 10ml가 되도록 묽힌다.
⑦ 시료 용액을 균질화 시킨다.
⑧ 추출 시료를 바이알의 절반 정도까지 취하여, HPCL 기기에 바이알을 꽂는다.
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