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DNA순도는 1.8~2.1 정도의 수치가 측정되었을 때 좋은 수치이고 이보다 낮게 측정 된다면 DNA의 용액 속에 단백질이 많이 포함되어 있거나 DNA를 elution한 buffer의 pH가 낮은 경우를 예상할 수 있다. 반면 높게 측정되었다면 RNA가 오염되었거나 DNA의 f
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<예 비 보 고 서>
DNA의 농도 및 순도의 측정과 재생 및 변성
(1) 실험 목적 : DNA의 정량방법에 대하여 습득하고, 온도에 따른 변화를 확인함 으로서 DNA의 생화학적 특성을 이해한다.
(2) 실험 원리
1.자외선-가시광선 분광 광도계 (UV-Vis Spectrop
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는 분자 생물학에서 매우 종요한 도구로 쓰인다. 즉, 두 생물 사이의 유전적인 연관 관계, 특 정 RNA의 검출, 특정 생물체의 DNA 상에서 반복되는 염기 배열의 결정, 그리고 DNA 분자 에서 특정한 염기 배열을 찾아 내는 작업에 매우 유용하다. ①
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DNA를 구성하는 네 가지 염기의 구조와 특성을 이해하고 DNA의 정량 방법과 순도결정 방법을 실험한다
3. 실험원리
★ Bradford Assay
원 리
- Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBBG) 가 arg, trp, tyr, his, phr 에 결합시 흡광도의 변화를 측정한다
- dye는 6개의
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DNA의 농도를 측정하시오.
< 소 혈액에서 추출한 Genomic DNA의 O.D값 측정 결과 >
260nm
280nm
농도
순도
1
0.448
0.224
4.48
2.0
2
0.443
0.259
4.43
1.7
3
0.378
0.211
3.78
1.8
4
0.435
0.225
4.35
1.9
※ DNA 농도
260nm 측정치 × 희석비율(200배) × 50 ÷ 1000 = 농도 μg/μl
※ DNA
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순도는 80%임을 알 수 있었고, 멜론 종자의 순도검정시 DNA mar
ker를 이용하여 검정할 수 있다는 결론도 얻었다.
5. References
- 농림수산식품부(2008) 수박ㆍ멜론의 품종 지문화 연구 및 순도검정 마커 개발. 연구보고서 3-84
- 이계동(2003) 수박 F1 종자
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DNA의 양은 528μg/ml이다. 반면, 단백질을 구성하는 아미노산 중 aromatic ring을 갖고 있는 thyrosine 이나 tryptophan은 280nm 의 빛을 흡수 하기 때문에 A260/A280의 비를 구하면 단백질이 얼마나 DNA에 오염되었나, 즉, DNA의 순도를 확인할 수 있는데 실험 결
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DNA와 일치하므로 해당 연구 결과를 인간에게 적용시킬 여지가 높아진다. 앞으로 줄기세포를 이용하여 근육분화에 대한 연구가 활발해 지리라 예상이 된다. 그리하여 기존에 정복하지 못했던 근육관련 질병들을 머지 않아 극복해 낼 수 있을
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