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DNA probe 실험을 진행하였다. 우선 추출한 DNA인 templats DNA와 random primer를 98도의 온도에서 10분동안 heating을 하였다. 그 후 바로 10분간 ice에 방치하였다. 여기서 사용한 random primer는 효소반응을 이용한 표지법이다. 즉, DNA의 생합성은 단일가닥의
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DNA를 확인하고 코스모진텍 社의 LaboPassTM Gel Extraction kit를 이용하여 절편을 정제하였다. 다음으로 분리한 절편을 BamHⅠ과 XbaⅠ으로 잘라 ligation을 위한 insert를 만들었고, 다시 한번 전기영동과 elution을 통해 크기를 확인하고, 회수하였다. 실험
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broth with antibiotics
STE buffer
alkaline lysis buffer Ⅰ
alkaline lysis buffer Ⅱ
alkaline lysis buffer Ⅲ
3M sodium acetate
PCI solution
70% EtOH
100% EtOH
elution buffer
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DNA순도는 1.8~2.1 정도의 수치가 측정되었을 때 좋은 수치이고 이보다 낮게 측정 된다면 DNA의 용액 속에 단백질이 많이 포함되어 있거나 DNA를 elution한 buffer의 pH가 낮은 경우를 예상할 수 있다. 반면 높게 측정되었다면 RNA가 오염되었거나 DNA의 f
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DNA를 얻을 수 있다.
추출한 DNA는 냉동 보관하여 사용한다.
Elution buffer 100㎕에 용해된 DNA 5㎕와 dH2O 995㎕를 혼합하여 200X 희석한다.
UV-Spectrophotometer를 사용하여 260nm와 280nm에서 O.D값을 측정하고 기록한다.
6. Results & Discussion
: UV-Spectrophotometer를
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DNA-PEI complexes를 제거한다.
4.IEX-EBA Chromatography
chromatography하기 앞서 loading하는 용액이 equilibration 단계의 buffer A와 같은 조건이 되도록 diafiltration step을 거친다. Chromatography는 buffer A로 equilibration 시킨 후 발효 액을 loading 한다. Elution 시켜주기
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