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한효소서열 앞에 CCC를 붙였다. CCCTCTAAGATCAAACGT은 Tm은 62.2 degrees C, GC content = 44.4%이다. Tm과 GC함량이 차이가 많이 나지 않으므로 Primer로써의 기능이 될 것 같다.
Forward primer = CTGCAGATGGTGAGCTTT
Reverse primer = CCCTCTAAGATCAAACGT # Material
# PCR Method
# Re
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PCR cycle이 돌수록 DNA pol의 활성이 줄어들기 때문이라는 사실도 알 수 있었다.
마지막으로 실험 결과 사진에서 band 색이 연하게 나온 사람도 있고 진하게 나온 사람도 있는데 색이 연하게 나온 이유는 정확히는 알 수 없지만 실험 과정에서 DNA cu
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band만 249bp부근에서 나타났다. 똑같이 mix한 뒤 두 개로 나눈 tube의 실험결과가 다른 것에 따른 원인으로 여러 가지를 생각해 보았다. 우선 두 개로 나눌 때, PCR에 필수적으로 필요한 template나 primer, polymerase, dNTP가 불균형하게 배분되었을 가능성
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band의 모양이 비슷할 것이며, 그렇지 않을 경우에는 서로 많은 차이를 나타낼 것이다. 이 RAPD PCR은 방법이 비교적 간단하고 쉬워 genome sequencing을 하기 전에 대략적인 종간의 관계를 나타내기 위해서 많이 사용된다.
8) Touchdown PCR
이 방법은 PCR
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PCR을 이용한 factor VIII 유전자내 Bcl I RFLP 양상 분석은 한국인 혈우병 환자 및 보인자의 진단에 있어 유용한 방법이며 한국인 혈우병 환자 약 6명중 1명에서 양성으로 나타남을 시사한다. 반면 XbaI RFLP 양상 분석은 BclI에 비하여 임상적 유용성이
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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