|
Cell culture
세포배양시 필요한 배양 조건
과학연구?
세포배양 실험법의 strategy
배양세포실험(in vitro) & 동물생체실험(in vivo)
Morphology of Cells in Culture
부유세포 배양
Adherent Cell vs. Suspension Cell
Passage and subculture
세포의 phenotype 변화
단층정
|
|
|
세포수와 직선 상관관계를 나타낸다. WST는 수용성의 tetrazolium salt로서 살아있는 세포와 반응하여 오렌지색 수용성의 formazan을 생성한다. 따라서 formazan을 녹이는 과정이 불필요하고 배양액을 제거할 필요가 없어 suspension cell에 대해서도 간편
|
|
|
세포부유액(1-1.5ml)을 옮긴다.
1,900 rpm에서 2분간 원심분리한다.
상층액을 제거한 후, 약 5ml의 배지에 cell pellet을 부유시킨다.
배양용 플라스크(T25cm2)에 세포부유액(cell suspension)을 옮긴다.
플라스크에 세포이름과 배양날짜 배지 등을 기입
|
|
|
cell을 suspension시키고 다시 ice에 20분간 정치했다. 원심분리 6000rpm 2분으로 cell을 가라앉힌 후 상등액을 제거하고, 1㎖ ice-cold 100mM CaCl₂에 조심스럽게 cell을 suspension시키고 다시 ice에 20분간 하는 실험을 반복한다. 침전된 세포를 200㎕ ice-cold 100mM
|
|
|
cell culture
LB (+Amp) broth에 single white/blue colony 각 1개씩을 선택해서 inoculation
↓
Incubate at 37℃, with shaking at 200rpm, for O/N
(2) Preparation of plasmid DNA
<Cell Harvest>
Transfer 1㎖ cell suspension to 1.5㎖ tube
↓ cfg at max speed, for 20"
↓ drain supernatant
<Cell Washing&
|
|
 |
세포를 깨는데 그 결과 아래 식과 같은 목적물이 나온다.
목적물로 나오는 DNA는 cell lysates의 점성을 높여서 후에 downstream processing 과정에서 생산물의 원하는 yield를 얻는데 어려움을 겪게 된다. 따라서 아래 Eq. 3와 같이 PEI(polyethyleneimine)가 extr
|
|
메뉴펼치기
