세포배양학(10.8).pptx

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목차

Cell culture
세포배양시 필요한 배양 조건
과학연구?
세포배양 실험법의 strategy
배양세포실험(in vitro) & 동물생체실험(in vivo)
Morphology of Cells in Culture
부유세포 배양
Adherent Cell vs. Suspension Cell
Passage and subculture
세포의 phenotype 변화
단층정치배양(P21)
Primary culture and cell line
세포의 입수_세포주은행
Contamination
세포배양의 윤리문제와 특허
세포배양 준비
1. 배양설비, 기기, 기구
멸균
1. 배양설비, 기기, 기구
Incubator
Water bath
Vacuum pump
Suction pump(machine)
도립현미경(Inverted microscopy)
배양기구-Pipette
배양기구-Dish, flask, multi-well plate
각 용기별(dish, flask, multi-well plate) 면적 및 배지 volum, cell 산출량
세정 & 주의
멸균
알콜램프
animal cell 배양 배지
Eagles Minimum Essential Media
RPMI 1640 Media
Liquid and Power
Animal cell culture medium
FBS (Fetal bovine serum) & FCS (Fetal calf Serum)
Serum free medium
Serum: Heat inactivation
Buffer: pH조절
L-glutamine
Antibiotics/antimycotics
Cell & evolutionary aspect
무균실(clean room)
세정
Complete medium(500mL)
동물세포 배양 시 필요한 기자재
Water bath
도립현미경(Inverted microscopy)
A comparison
액체질소보존통-cell stock보관
Passage and subculture
단층정치배양
Confluency
Contact Inhibition
Anchorage Dependence
Trypsin-EDTA(ethylen diamin tetraacetic acid)
기계적 박리
Trypan blue staining
Hemocytometer
예제
Cell Counter
계대 timing
세포의 동결보존
세포동결보존 주의사항
Animal cell cryopreservation
Primary cell & cell line
Immotalized cell line

본문내용

Cell culture

• 주로 동물세포(animal cell)배양을 의미하며, 세포의 자연적 환경(in vivo, natural environment)이 아닌 실험적으로 통제된 환경(in vitro, artifically controled condition) 하에서 세포를 배양하는 것을 의미
- 주로 동물세포(animal cell)
- 넓은 의미로 식물세포, 곰팡이, 미생물(virus, bacteria, protists)배양 포함




세포배양시 필요한 배양 조건

• Culture conditions vary widely for each cell type.
Medium that supplies the essential nutrients (amino acids, carbohydrates, vitamins, minerals), growth • factors, hormones, serum.
• gases (O2, CO2)
• physicochemical environment (pH, temperature).




과학연구?

　≪ 그 림 ≫




세포배양 실험법의 strategy

• 실험목적이 분명해야 하고
• 그 목적을 위해서는 세포배양이 가장 적적한 실험 방법인가?

생체내에서가 아니라 자연계와 동떨어진 인공적인 조건에서 행해지는 실험이 생리학적 생물학적으로 어떤 의미를 가지는가? 얼마나 생명현상을 대변해 줄 수 있는가를 신중히 판단해야 한다.
→ 중요한 것은 무엇을 알고 싶어서 실험을 했는가, 그리고 그 실험에서 어떤 의미가 있을가를 생각하는 일이다




배양세포실험(in vitro) & 동물생체실험(in vivo)

　≪ 그 림 ≫

세포가 우주?
- 개개 세포에서 인체를 예측 하기 어려움. cell→tissue→organ→organ system ???

An Increasing number of researchers have questioned the validity of studying
cells in an environment that in so far removed from the in vivio state




　≪ 그 림 ≫

세포가 우주
개개 부품에서 인체를 예측
하기 어려움




≪ … 중 략 … ≫




세포배양 준비

• 미생물(세균, 곰팡이, mycoplasma등)의 오염을 막기 위해
- 무균실(배양실)이용
- 배양기구의 세정, 멸균
- 배양 배지, 완충액의 멸균




1. 배양설비, 기기, 기구

• 무균실(clean room)
- Filter로 여과된 멸균 공기 유지
- 양압유지를 통한 오염된 외부 공기 유입 차단
- 천정에 살균등

　≪ 사 진 ≫




멸균

• 배양에 사용되는 용액, 배양기구, 무균복 등을 각각의 성질이 손상되지 않는 방법으로 멸균
• 각각에 적합한 멸균법 선택
• 내열성은 autoclave or 건열멸군
• 열에 불안정_ethylene oxide멸균, 자외선멸균, 방사선멸균
• 여과멸균: 열에 불안정한 성분을 포함한 배지의 멸균에 적합 사전에 여과기에 membrane filter를 장착해서 멸균, 일회용 membrane filter 장착 여과기도 시판

키워드

Cell culture,   부유세포 배양,   Adherent Cell,   Suspension Cell ,   세포의 phenotype 변화,   단층정치배양,   Contamination,   멸균,   배양기구,   FBS