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chromatography (음이온 교환수지법)
3주차 실험 - Cation exchanger chromatography (양이온 교환수지법)
4주차 실험 → HIC (hydrophobic interaction chromatography)
5주차 실험 - affinity chromatography
6주차 실험 - protein 정량 (by Lorry and Folin method at mg level)
7주차 실험
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affinity를 낮추어 결합을
끊어준다. 이 과정이 실질적으로 fibronectin을 분리해내는 과정이다.
여섯 번째, 8M의 Urea와 e.q buffer를 column에 넣어 resin에 결합한 모든 protein을 끊어 제거한 후, column을 washing한다.
전반적인 실험이 빠르게 진행되어 미리
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affinity chromatography들을 이용하여 빠르고 간편한 혼성단백질의 분리가 가능하게 한다. 이온 교환 크로마토그래피(Ion exchange chromatography),
소수성 크로마토그래피(Hydrophobic interaction chromatography),
친화성 크로마토그래피(affinity chromatography),
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로테인 A, 프로테인 G, 글루타티온-S-전이효소(GST), His6 등이 있다.
■사용법
: 이들 융합단백질은 친화 크로마토그래피(affinity chromatography)를 이용하여 분리할 수 있다. 목적 단백질의 N-말단에 GST를 결합시킨 경우 GST의 기질인 글루타치온 고정
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Affinity : Solid support의 특정한 ligand와 한 성분 사이의 친화력에 의해 머무름이 일어난다.
크로마토그래피는 화합물들의 혼합 상태를 구성 성분들로 분리하는 방법이다. 각각의 구성 성분들로 분리함으로써, 다양한 시료 성분들을 정성적으로
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