|
PCR을 하였을 때 나타나는 여러가지 PCR 산물을 비교함으로써 서로 다른 세포로부터 증폭된 PCR 산물에 차이가 있는지 없는지를 확인하는 방법 -PCR의 3단계-
1. DNA의 변성(Denaturation)
2. Primer의 결합(Annealing)
3. DNA의 합성(Polymerization)
RT-
|
|
|
DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.
PCR작용에서는 프라이머와 DNA복제에 필요한 요소들이DNA시료에 더해진다. 혼합물은 DNA를 변성시키기 위해 가
|
|
|
PCR mix를 준비하는 과정에서 template외에 다른 종류의 DNA가 섞였거나, 변형된 primer가 template 중간에 annealing되는 등의 이유로 다양한 size의 product가 만들어진 것이리라 추정된다. 또, 화요일 실험한 조가 나타낸 모든 band가 수요일 실험 조보다 옅
|
|
|
PCR이 성공할 수 있었던 것은 1984년 열에 잘 견디는 중합효소가 얻어졌기 때문이다. 원래 PCR에는 대장균 DNA 중합효소를 사용하였는데, 이 효소는 열에 민감하여 이중사슬 DNA를 분리하는데 사용한 온도에서는 그 기능을 잃어버린다. 그러므로
|
|
|
DNA 중합효소(TaqDNA 중합효소)와 완충액
② 2mM dNTP 혼합액
③ 프라이머(Oligo deoxynucleotide primer)
④ 주형 DNA
⑤ 0.8% 아가로스(TAE 완충액 100㎖ 중에 0.8g의 아가로스를 녹인 것)
⑥ 50 TAE 완충액
⑦ 10 PCR 완충액
6. 참고문헌
Ⅰ. 서적
1. 미생물학실험서.
|
|
 |
PCR의 기본 원리
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p746-748
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p748 Abstract
Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
Disc
|
|
|
경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
|
|
 |
PCR, Western-blot, 플라스미드 DNA 정제, 유전형질의 전환(Tranfomation), ELISA assay, transfection, 단백질추출, 약물효능평가, 동물실험을 진행...(이하생략) - 자기소개서
1. 동아ST를 선택한 이유와 입사 후 회사에서 이루고 싶은 꿈을 기술해 주세요.
|
|
 |
DNA와 RNA의 차이점은 무엇인가요?
5
바이오니아가 무슨 일을 하는 기업인지 알고 있는지?
6
우리 회사 제품을 써보셨나요?
7
연구하던 주제는 뭐였는지?
8
Real time PCR의 원리에 대하여 설명하세요.
9
사이버그린과 택맨프로브의 차이는 무엇인가
|
|
메뉴펼치기
