2 순수배양(예비)

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2 순수배양(예비)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Subject
2. Object
3. Theory & Principle
4. Apparatus & Reagents
5. Procedure
6. Reference books

본문내용

규소화합물로 된 여과기 사용
- 셀룰로오즈 아세테이트(cellulose acatate) 같은 여과막* 사용
*세균 제거용 여과막의 직경 : 0.22 μm, virus 통과 가능
- 여과용 박막의 종류
① Depth filter : fibrous sheet or mat, made from paper, asbestos, or glass fiber
② Membrane filter : tough disc, generally composed of cellulose acetate, cellulose nitrate, polycarbonate & polyvinylidone fluoride, in such a way that it contains a large number of tiny holes like a sieve
③ Nucleation track(Nuclepore) filter: treating very thin polycarbonate films(10 μm thickness) with nuclear radiation and then etching the film with a chemical →true sieve, removing all particles greater than hole size(5 μm)
op.cit. http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/autoclave.jpg
op.cit.
http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/%EA%B3%A0%EC%95%95%EB%A9%B8%EA%B7%A0%EA%B8%B0.jpg
<전형적인 고압멸균기의 종단면>
op.cit.
http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/%EB%B0%95%EB%A7%89%EC%97%AC%EA%B3%BC.jpg
<여과에 의한 멸균법>
op.cit.
http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/%EC%97%AC%EA%B3%BC%EC%9E%A5%EC%B9%98.jpg
<박막여과 장치의 단면도>
op.cit. http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/filter.jpg
<천공크기 0.2 μm 박막(Ultipor nylon membrane)에 걸러진 Bacillus megateirum>
(x2,000)
op.cit. http://cms.daegu.ac.kr/sgpark/microbiology/filter1.jpg
<천공크기 0.2 μm 박막(Ultipor nylon membrane)에 걸러진 Bacillus megateirum>
(x2,000)
4. Apparatus & Reagents
백금이, 알코올 램프, Enterrococcus faecalis, Bacillus subtilis, Escherichia Coli, 이쑤시개, TSB 액상배지, TSB 고상배지, Shaking incubator, 10% Glycerol, Clean Bench, Incubator, Micropipette, Microtube, Culture Tube, Petri Dish, Spreader
5. Procedure
-첫째 날-
① 10-2의 희석액을 10-6, 10-7, 10-8로 희석한다.
② 희석액 (6,7,8)을 150㎕ 채취하여 도말 평판법(spreading) 또는 500㎕로 overlay를 시행한다.
③ 배지에 도포한 배양액이 다 마르면 뒤집어서 37℃ Incubator에 배양한다.
④ 16시간 후에 균을 관찰한다.
-둘째 날-
① 16시간 37℃, Incubator에서 배양한 균을 확인하고 서로 colony 모양이 다른 것을 이쑤시개로 균을 채취한다.
② 균을 채취한 이쑤시개를 미리 준비한 Culture Tube에 넣어둔 TSB 액상배지 3mL에 접종하고, 37℃, 200rpm에서 16시간 배양한다.(Shaking Incubator)
-셋째 날-
① 배양액 1mL를 Streaking하고 1mL를 1.5mL Micro tube에 넣고 Centrifuge(8000rpm, 4℃, 3분)하고 10% glycerol롤 Stock을 만든다.
② 다음 실험 시간에 순수 배양을 잘 했는지 염색법을 이용하여 현미경 관찰한다.
-Stock 제조 과정-
<그림1. Centrifuge한 것> <그림2. 배양액을 버린 것> <그림3. 10% Glycerol을 넣고
현탁한 사진>
① 균1, 균2, 균3 (균 하나당 2개씩, 총 6개)를 1mL씩 1.5mL Micro Tube에 첨가한 것을 Centrifuge(8000rpm, 4℃, 5분)한다. (그림1)
② Centrifuge한 것을 <그림 2>와 같이 배양액을 버린다.
③ 배양액을 버리고 10% Glycerol 1mL를 넣고 현탁시킨다.
④ -80℃ Deep freezer(초저온 냉동고)에 보관한다.
<참고>
6. Reference books
Encyclopedia BRITANNICA '세균~세균의 특징'
-서정운(1993), 공업미생물학, 형설출판사
-정동효(1993), 발효와 미생물공학, 선진문화사
-이건섭(1993), 진단병원미생물학, 고려의학
-이시카와 외, 정동효 역(1993), 도해미생물학핸드북, 지성의 샘
-홍순우·박계인·이영록(1993), 기초·응용미생물학, 광림사
-대한미생물학회(1991), 의학미생물학, 여문각
-에코 미크로, 손영수 역(1988), 소사전-미생물의 수첩, 전파과학사
-S. Baron(1991), Medical Biology, 3rd ed, Churchill Livingstone
-한국생물과학협회(1984), 생물학사전, 교문사
박상규, 미생물학 강의노트 '순수배양의 정의~여과에 의한 멸균법'
-민경희(1998), 대학미생물학, 탐구당
-Joanne M. Willey, Linda M. Sherwood, CHRISTOPHER J. WOOLVERTON 저, 김영민, -김경민, 박만성 역(2012), 일반미생물학, 라이프사이언스
-이재열(1997), 보이지 않는 권력자, 라이프사이언스
김선희, 김영자, 김석홍 외 4명(2003), 미생물학 실습, 고려의학, p.79

키워드

미생물의약품,   순수배양,   미생물실험,   세균