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목차
1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 원리
(1) 아밀라제(Amylase)
(2) 시료 채취
(3) Enrichment culture
(4) 도말평판법(Spread plate method)
(5) 균수의 측정(CFU, Colony Forming Unit)
(6) 균주 보존법
4. 실험 방법
5. 참고 문헌
2. 실험 목적
3. 이론 및 원리
(1) 아밀라제(Amylase)
(2) 시료 채취
(3) Enrichment culture
(4) 도말평판법(Spread plate method)
(5) 균수의 측정(CFU, Colony Forming Unit)
(6) 균주 보존법
4. 실험 방법
5. 참고 문헌
본문내용
보존방법이 아니라 두 가지 이상의 방법을 사용하고, 보존 균주도 둘 이상을 만들어 놓는다. 그리고 원래균주도 폐기하지 않고 보존해둔다.
④ 보존조작이 완전히 이루어졌는지를 확실히 알기 위해 균주의 생사와 잡균의 침입을 바로 확인한다. 이 확인은 보존 중에도 하도록 한다.
⑤ 다시 실험에 사용할 때는 균주의 성상을 조사해 원래 균주의 기록과 비교한다.
⑥ 보존 장소는 안전하고 오염이 적은 관리하기 쉬운 장소로 한다.
4. 실험 방법
(1) 1g의 마른 토양을 9㎖의 멸균수가 들어 있는 멸균된 시험관에 넣고 충분히 흔들거나 vortex를 이용해서 잘 섞는다(진탕기에서 약 10분간).
(2) 토양 현탄액 100㎕를 900㎕의 멸균수가 들어 있는 시험관에 옮긴다. 이와 같은 방법으로 피펫을 이용하여 연속적으로 10-2, 10-3, 10-4의 희석배율로 희석액을 만든다.
(3) 연속적으로 희석된 토양 희석액 100㎕를 희석배율 별로 각 배지 위에 떨어뜨리고 도말봉으 로 부드럽게 도말한다(이 때, 배지는 Starch agar medium(Beef extract 3g, Peptone 5g, Soluble starch 10g, Agar 12g, pH 7.3)을 사용한다). 희석배수가 바뀌거나 토양 시료를 바 꿀 때는 도말봉을 95% 에탄올에 담갔다가 살짝 알코올램프에 불을 붙여 잠시 식힌 후 다 시 사용한다.
(4) 토양 희석액을 도말한 배지를 37 항온 배양기에 넣고, 1일간 배양한다. 그 후에 amylase 분비 세균의 존재 여부를 파악하기 위해서 Lugol`s Iodine 용액(Iodine 1g, Potassium iodide 2g, 증류수(Distilled water) 300㎖)을 뿌려 1∼2분간 둔다.
(5) 배지 전체 색은 진한 보라색이지만 전분 분해균은 콜로니 주위가 투명해진다.
실험시 주의할 점
토양을 희석할 때 첫 용기에 들어 있는 토양 현탁액은 입자가 굵은 것이 많아 피펫 끝이 막힐 수가 있으므로 피펫 끝 구멍을 크게 하여 사용하는 것이 좋다. 그리고 농도가 높은 곳 에서 낮은 곳으로 시료를 희석할 때에는 반드시 사용한 tip을 바꾸어야 한다. 만약 젖은 토 양을 사용할 경우 시료에 따라 수분함량이 다를 수 있으므로 배지에서 미생물 콜로니 수를 조사한 후 토양수분 함량도 측정하여 건조 중량 1g당 밀도를 비교해야 한다.
토양시료 내의 미생물 수가 너무 많으면 배지에서 특정 성분이 모두 분해되어 밀도 조사가 어려울 수 있다.
토양시료에 따라서 콜로니가 천천히 형성될 수도 있으므로 상태에 따라 1∼2일 더 배양해 도 된다.
5. 참고 문헌
(1) 미생물학실험. 고영진 외 19인 저. 월드사이언스. 2000, 27p, 28p, 38∼40pp.
(2) 미생물학실험. 방병호 외 7인 저. 진로연구사 2002, 56p, 57p.
(3) 미생물학 실험서. 한국미생물학회. 을유문화사. 1998, 83∼84p. 57p, 63∼66pp, 345∼348
pp.
(4) 식품미생물학. 김창한 외 3인 저. 유한문화사. 2004, 82∼86pp, 135p.
(5) 식품미생물학 및 실험. 홍태희 외 5인 저. 지구문화사. 2000, 322p, 329∼332pp.
(6) 응용미생물학. 이갑상 저. 대학서림. 2000, 215p, 216p, 278∼280pp.
(7) 환경미생물실험. 박철희. 최석순 저. 東和技術. 2002, 77p, 78p, 111p, 112p.
(8) 환경미생물 실험법. 김주영, 정동옥, 서승교 저. 東和技術. 1997, 39p, 45p, 51∼54pp.
(9) 환경미생물학실험. 김정목, 남범식 저. 東和技術. 2001, 124p, 125p.
④ 보존조작이 완전히 이루어졌는지를 확실히 알기 위해 균주의 생사와 잡균의 침입을 바로 확인한다. 이 확인은 보존 중에도 하도록 한다.
⑤ 다시 실험에 사용할 때는 균주의 성상을 조사해 원래 균주의 기록과 비교한다.
⑥ 보존 장소는 안전하고 오염이 적은 관리하기 쉬운 장소로 한다.
4. 실험 방법
(1) 1g의 마른 토양을 9㎖의 멸균수가 들어 있는 멸균된 시험관에 넣고 충분히 흔들거나 vortex를 이용해서 잘 섞는다(진탕기에서 약 10분간).
(2) 토양 현탄액 100㎕를 900㎕의 멸균수가 들어 있는 시험관에 옮긴다. 이와 같은 방법으로 피펫을 이용하여 연속적으로 10-2, 10-3, 10-4의 희석배율로 희석액을 만든다.
(3) 연속적으로 희석된 토양 희석액 100㎕를 희석배율 별로 각 배지 위에 떨어뜨리고 도말봉으 로 부드럽게 도말한다(이 때, 배지는 Starch agar medium(Beef extract 3g, Peptone 5g, Soluble starch 10g, Agar 12g, pH 7.3)을 사용한다). 희석배수가 바뀌거나 토양 시료를 바 꿀 때는 도말봉을 95% 에탄올에 담갔다가 살짝 알코올램프에 불을 붙여 잠시 식힌 후 다 시 사용한다.
(4) 토양 희석액을 도말한 배지를 37 항온 배양기에 넣고, 1일간 배양한다. 그 후에 amylase 분비 세균의 존재 여부를 파악하기 위해서 Lugol`s Iodine 용액(Iodine 1g, Potassium iodide 2g, 증류수(Distilled water) 300㎖)을 뿌려 1∼2분간 둔다.
(5) 배지 전체 색은 진한 보라색이지만 전분 분해균은 콜로니 주위가 투명해진다.
실험시 주의할 점
토양을 희석할 때 첫 용기에 들어 있는 토양 현탁액은 입자가 굵은 것이 많아 피펫 끝이 막힐 수가 있으므로 피펫 끝 구멍을 크게 하여 사용하는 것이 좋다. 그리고 농도가 높은 곳 에서 낮은 곳으로 시료를 희석할 때에는 반드시 사용한 tip을 바꾸어야 한다. 만약 젖은 토 양을 사용할 경우 시료에 따라 수분함량이 다를 수 있으므로 배지에서 미생물 콜로니 수를 조사한 후 토양수분 함량도 측정하여 건조 중량 1g당 밀도를 비교해야 한다.
토양시료 내의 미생물 수가 너무 많으면 배지에서 특정 성분이 모두 분해되어 밀도 조사가 어려울 수 있다.
토양시료에 따라서 콜로니가 천천히 형성될 수도 있으므로 상태에 따라 1∼2일 더 배양해 도 된다.
5. 참고 문헌
(1) 미생물학실험. 고영진 외 19인 저. 월드사이언스. 2000, 27p, 28p, 38∼40pp.
(2) 미생물학실험. 방병호 외 7인 저. 진로연구사 2002, 56p, 57p.
(3) 미생물학 실험서. 한국미생물학회. 을유문화사. 1998, 83∼84p. 57p, 63∼66pp, 345∼348
pp.
(4) 식품미생물학. 김창한 외 3인 저. 유한문화사. 2004, 82∼86pp, 135p.
(5) 식품미생물학 및 실험. 홍태희 외 5인 저. 지구문화사. 2000, 322p, 329∼332pp.
(6) 응용미생물학. 이갑상 저. 대학서림. 2000, 215p, 216p, 278∼280pp.
(7) 환경미생물실험. 박철희. 최석순 저. 東和技術. 2002, 77p, 78p, 111p, 112p.
(8) 환경미생물 실험법. 김주영, 정동옥, 서승교 저. 東和技術. 1997, 39p, 45p, 51∼54pp.
(9) 환경미생물학실험. 김정목, 남범식 저. 東和技術. 2001, 124p, 125p.
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