조단백질 정량

본문내용

도 ninhydrin 반응, biuret법, phenol법, 자외선 흡수 spectrum을 이용하는 법, Lowry 법 등의 방법들이 있다. (표 3참조)
정 량 법
특 징
kjeldahl법
단백질내의 일정한 질소함량을 기준으로
질소함량을 정량 하여 구하는 방법
ninhydrin 반응
아미노산과 ninhydrin의 가열반응으로
(청자색의 색소 형성)을 이용
biuret법
알칼리성 수용액 내에서 2가 구리이온과
biuret의 착 화합물(적자색을 형성) 형성,
발색반응을 이용해서 단백질정량에 이용
phenol법
folin 시약을 이용한 정량 법
자외선 흡수 spectrum을 이용하는 법
특정 단백질이 280nm부근의
파장자외선을 흡수하는 성질을 이용
Lowry 법
biuret법과 phenol법을 합성한 방법
<표3> 조단백질 정량법
다음으로 실험기구에 대하여 알아보자. 본 실험에서는 Semi micro 증류장치를 사용하였다. 각 장치에 대하여 알아보면, 삼각플라스크(E) 에 붕산과 혼합지시약을 넣는다. 이 때 냉각관의 끝 부분(G)이 용액에 충분히 잠기도록 하여 증류시에 냉각관을 통하여 나오는 암모니아가 모두 용액과 반응하게 하여야 한다. 이 과정이 미흡하여 오차가 발생한 것으로 앞서 설명하였다. 증류플라스크(C)에 분해액과 NaOH(25ml)을 깔대기(F)를 통해 주입하고, 플라스크(A)에 5%의 황산을 넣고, 코크(b)는 닫고, 코크(c)는 열고 가열하다가 코크(d)를 닫은 후 코크(b)를 열고, 코크(c)는 닫는다. NaOH 용액으로 인해 액이 알칼리가 되도록 하는 것이다. 증류플라스크(C)의 액은 NaOH 첨가로 진한 다갈색이 된다. 계속 플라스크(A)를 가열하여 증류플라스크(C)에 수증기를 공급하면서 약 30~40분간 증류한다. 플라스크(A)에 5%의 황산이 관을 통해 이동하는데, 황산이 액화가 된것은 B로 떨어지고, 액화되지 않은 것은 계속 이동해 증류플라스크(C)의 액과 만나 중화반응이 일어나게 된다. 증류플라스크(C)에서 발생되는 암모니아는 냉각관(D)를 통하여 수기(E)로 들어가 붕산에 의해 기체 포집된다.
<그림6> Semi micro 증류장치
다음으로 실험을 진행하면서 다양하게 변하는 색 변화에 대하여 알아보자. 처음에는 검은색임을 확인할 수 있는데, 이것은 유산지와 단백질이 황산에 의해 녹으며 타듯이 되었기 때문이고, 시료의 분해를 진행하면서 시료 중 질소는 암모니아로 변하게 되는데 이 암모니아는 반응액의 황산과 결합하여 분해액 중에 황산암모늄의 형태로 남게 된다. 이 때 산화제인 촉매를 가하면 반응온도가 높아짐에 따라 SO₃가 생성되고, 검은색에서 다갈색으로 색이 변하다가 가열이 끝나기 전에 청색(에메랄드색)이 나타난다. 그 후 냉각을 시키게 되면 이로 인해 청색에서 무색으로 변한다. 증류플라스크의 액은 NaOH를 첨가하면 진한 다갈색으로 변한다. 그리고 만약 본 실험처럼 변형 실험을 하지 않고 앞서 원리에서 설명하였던 것과 같은 역적정을 이용하는 본래 Kjeldahl 법을 이용했다면, 마지막으로 0.05N-H₂SO₄용액의 양을 0.05N-NaOH 용액으로 적정하는데, 혼합지시약의 색이 자색으로부터 회색으로 변하는 점을 반응종점으로 하여 색의 변화를 확인할 수 있다. 또한 반응종점을 조금 지나게 되면 용액의 색은 녹색으로 변한다.
Reference
「식품분석」, 고명수외, 2002년, 유한문화사 P139~154
「쉬운 식품분석」, 이근보외, 2006년, 유한문화사 P145~157
「표준 식품분석학 이론 및 실험」, 채수규외, 2003년, 지구문화사 P243~253
조단백 정량
(Kjeldahl 법)
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키워드

조단백,   단백질,   켈달,   Kjeldahl,   식품,   화학,   분석,   실험