효소 반응속도론

목차

1. 실험목적

2. 실험원리

3. 시약 및 기자재

4. 실험방법

5. 실험참고사항

6. 참고문헌

본문내용

열에 의해 활성을 잃어버리는데 비하여 보조인자는 열에 안정하다.
(3) 녹말(starch)의 분해
식물에서 영양물의 저장물질은 녹말이며, 녹말에는 두 종류가 있다. 가지가 없는 유형의 녹말인 아밀로오스(amylose)는 α-1,4 결합으로 연결된 글루코오스 잔기들로 이루어져 있다. 가지가 있는 유형의 녹말인 아밀로펙틴(amylopectin)은 30개의 α-1,4 결합마다 약 한 개 정도의 α-1,6 결합을 가지고 있으므로, 가지가 난 정도가 더 낮다는 것을 제외하고는 글리코겐과 유사하다.
사람이 섭취하는 탄수화물의 반 이상이 녹말이다. 아밀로펙틴과 아밀로오스는 둘 다 타액샘과 췌장에서 분비되는 α-아밀라아제(α-amylase)로 빠르게 가수분해된다. 글리코시드 내부가수분해효소의 하나인 α-아밀라아제는 당 사슬 내부의 α-1,4 결합을 가수분해하여 말토오스(maltose), 말토트리오스(maltotriose) 그리고 α-덱스트린(α-dextrin)들을 생성한다. 말토오스는 α-1,4 결합으로 연결된 두 개의 글루코오스 잔기로 이루어져 있고, 말토트리오스는 α-1,4 결합으로 연결된 잔기 세 개로 이루어져 있다. α-덱스트린은 α-1,4 결합 이외에 α-1,6 결합으로 연결되어 있는 몇 개의 글루코오스 단위들로 이루어져 있다. 말토오스와 말토트리오스는 말토오스 가수분해효소(maltase)로 글루코오스로 가수분해되는 데 반해서, α-덱스트린은 α-덱스트린 가수분해효소(α-dextrinase)로 글루코오스로 가수분해된다. 엿기름에는 β-아밀라아제(β-amylase)가 들어 있는데, 그것은 비환원성 말단으로부터 순차적으로 이당류 단위를 제거하여 녹말을 말토오스로 가수분해하는 효소이다. 보리나 그 밖의 곡물로부터 얻어지는 엿기름은 맥주를 만드는 데 사용된다.
3. 시약 및 기자재
(1) 시약
DNS 시약, Maltose solution(1g/ℓ), Starch solution(20g/ℓ), β-amylase solution(1g/ℓ), NaOH(0.1N)
(2) 기자재
Spectrophtometer, Water bath, Timer, Test tube
4. 실험방법
(1) 실험용액의 준비
- Phosphate buffer
0.1M KHPO(M.W. 136.09) 110㎖, 0.1M NaHPO(M.W. 142.0) 90㎖를 섞어 200㎖ 제조한다.
(2) Phosphate buffer 1㎖와 starch solution 1.25㎖를 시험관에 넣고 37℃ 에서 10분간 정치시킨다.
(3) 이 용액에 enzyme solution(1g/ℓ) 0.25㎖를 첨가하여 1.5분간 반응시킨다.
(4) 0.1N NaOH(반응을 정지시키는 역할) 5㎖를 첨가한 후 4℃에서 보관한다.
(5) 3㎖ sample을 취하여 3㎖ DNS reagent를 첨가한다.
(6) 이 용액을 100℃에서 15분간 중탕시킨 후 시험관을 실온에 방치하여 식힌다.
(7) 표준 시료를 포함한 각 시험관 575㎚에서 흡광도를 측정한다.
(8) Enzyme activity 및 효소반응 초기속도를 구한다.
(9) Lineweaver-Burk plot을 이용하여 1/V vs. 1/S curve를 작성한다.
(10) Michaelis-Menten equation을 구한다.
5. 실험참고사항
(1) 선택한 기질의 농도가 너무 낮거나 높으면 기질의 농도와 반응속도의 역수(1/V vs. 1/S)를 취하여 얻어진 결과를 Lineweaver-Burk 방법으로 그래프 용지에 도 시할 때 점들이 모이게 되어 직선을 얻기가 어려워지므로 주의하여야 한다.
(2) Lineweaver-Burk 방법으로는 V은 정확히 구할 수 있지만 정확한 K값의 결 정은 매우 어렵다. 왜냐하면 각 실험값의 역수간의 오차는 대칭적으로 일정하지 않기 때문이다. 그러므로 이같은 도식화에 최소자승법을 적용할 때에는 주의하여야 한다. 낮은 기질 농도에서 구한 실험값은 높은 기질농도에서의 실험값보다 직선의 기울기와 절편에 더 큰 영향을 미친다.
6. 참고문헌
(1) 박인원 외 8인 공역, Stryer 생화학(하), 서울외국서적, 1999, pp.496~497
(2) 김의락 외 11인 공저, 최신 생화학, 형설출판사, 1993, pp.136~139
(3) 안용근 저, 효소단백질 정제법, 양서각, 1994, pp.6~7
(4) 김윤수 저, 생화학, 의학문화사, 1993, pp.309, 312
(5) 구윤모 외 3인 공역, 생물공정공학, 교보문고, 2003, pp.68~73

키워드

효소,   반응속도론,   활성,   녹말,   분광광도법